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卵巢癌是死亡率居第一位的妇科恶性肿瘤,大约60%～70%的患者在就诊时已处于晚期。目前对于晚期卵巢癌的标准治疗方案是肿瘤细胞减灭术和术后辅以顺铂为基础的联合化疗。耐药的产生直接影响化疗效果及生存率。表皮生长因子受体3型突变体(EGFRvⅢ)是最常见的EGFR的突变形式。在许多实体瘤脑胶质瘤,非小细胞肺癌,乳腺癌,前列腺癌,和卵巢腺癌中能观察到,并且与较差的临床预后紧密相关。因此EGFRvⅢ在肿瘤的发生和发展过程中起着至关重要的作用,在肿瘤的生物治疗中具有相当的优势。CH12是经12H23抗体改造,杂交瘤技术获得的抗EGFRvⅢ的人鼠嵌合性抗体,其运用前景已在前期肝癌的体外及体内试验中得到证明。本课题拟在研究CH12单抗对卵巢腺癌细胞系在体外的抑瘤效果以及与顺铂联合用药的药效关系。并从细胞周期改变及凋亡的作用进一步解释其联合作用的药效关系。第一部分卵巢上皮性肿瘤细胞系中EGFRVⅢ的表达[目的]：分别从蛋白水平和RNA水平了解EGFRVⅢ在卵巢癌细胞系SK-OV-3及Caov-3中的表达。[方法]采用蛋白质印记western-blot及反转录聚合酶链式反应RT-PCR法测定卵巢癌细胞系SK-OV-3及Caov-3中EGFRvⅢ的表达水平。[结果]：在蛋白水平以及核酸水平上两种卵巢癌细胞系均有EGFRvⅢ的表达。[结论]：在卵巢癌细胞系中能检测到EGFRvⅢ的表达,可以运用抗EGFRVⅢ单克隆抗体CH12靶向卵巢癌EGFRvⅢ进行体外治疗研究。第二部分抗EGFRVⅢ单抗CH12与卵巢癌细胞系SK-OV-3及Caov-3的结合力[目的]了解抗EGFRvⅢ单克隆抗体与卵巢癌细胞系SK-OV-3及Caov-3的亲和力[方法]：流式细胞术检测抗体CH12和卵巢癌细胞系SK-OV-3及Caov-3的亲和力。[结果]：卵巢癌细胞系SK-OV-3及Caov-3(?)能够有效结合CH12抗体[结论]CH12抗体可以用于对卵巢癌细胞系SK-OV-3及Caov-3靶向EGFRVⅢ的体外治疗研究。第三部分抗EGFRVⅢ单抗CH12联合顺铂对卵巢癌治疗的体外研究[目的]：抗EGFRVⅢ单抗CH12以及联合顺铂对卵巢癌体外治疗的效果。[方法]Cell Counting Ki-8试验分别检测顺铂(0.1,0.2、0.3、1、2、3ug/m1),CH12抗体(20、40、80、160、320、400ug/m1)单独用药以及给予恒定浓度的顺铂(IC25=2ug/ml)联合不同浓度的CH12抗体(20.40、80、160.320ug/ml)对卵巢癌细胞系SK-OV-3的细胞增殖抑制作用。根据药物联合指数公式推测两种抗体和顺铂是否存在协同、加合或则拮抗作用。[结果]：顺铂以及单用CH12抗体对卵巢癌细胞系SK-OV-3的抑瘤作用呈剂量依赖性。其中顺铂(0.1,0.2,0.3,1,2,3ug/ml)对SK-OV-3细胞的抑制率为(0.59±2.14)%,(1.35±2.12)%,(2.05±2.13)%,(17.19±6.09)%,(23.60±3.47)%,(50.82±6.99)%,对Caov-3的抑制率为(7.12±3.9)%,(13.36±4.72)%,(24.17±1.99)%,(65.44±6.02)%,(69.71±4.15)%,(77.43±5.98)%。SK-OV-3较Caov-3细胞系更耐药于顺铂,此结果与ATCC提供的细胞系的属性相符。给予不同浓度20,40,80,160,320,400ug/ml)CH12抗体单独作用于耐药细胞株SK-OV-3,细胞抑制率分别为(18.07±13.85)%,(25.53±9.09)%,(36.11±11.66)%,(40.51±2.96)%(44.59±2.51)%,(39.99±3.04)%联合使细胞抑制率为25%浓度的顺铂,CH12抗体浓度依次为(20,40,80,160,320ug/ml)对细胞增殖抑制率分别为(59.26±2.01)%,(63.63±4.47)%,(68.31±1.96)%,(73.58±3.09)%,(75.10±6.92)%.,当联合抑制率为50%时,药物联合结合指数CI=0.6872(<1)两者有协同作用[结论]：CH12联合顺铂用药组与单用抗体组组间抑制率有显著性差异(p<0.05),在联合用药抑制率到50%时,两种药物有协同作用。CH12单克隆抗体对顺铂耐药的卵巢癌细胞系有良好的临床运用潜力。第四部分抗EGFRvⅢ单抗CH12、顺铂以及两药联合对卵巢癌细胞周期及凋亡的影响[目的]：研究CH12单克隆抗体、顺铂以及二者联合用药分别对卵巢癌SK-OV-3细胞细胞周期分布和诱导凋亡的改变。[方法]：通过流式细胞检测AnneixV-PI双标法选取中间浓度的CH12单抗80ug/ml,细胞抑制率为25%浓度的顺铂2ug/ml分别检测单独处理以及联合二者48h后SK-OV-3细胞的周期分布和凋亡率。[结果]：检测发现细胞周期非特异性药物顺铂2ug/ml,顺铂80ug/ml单独对S期的阻滞分别为(41.99±2.12)%、(32.39±5.95)%,二者联合可以使卵巢癌细胞阻滞在S期达(51.47±3.78)%,与对照组相比无显著的差异(P>0.05),单独用药凋亡发生率分别为(12.38±2.41)%,(5.13±2.33)%。二者联合细胞凋亡率升至(31.48±4.76)%。单独用药与联合用药诱导的凋亡率有统计学差异(P<0.05)。两药体外较好的联合协同抗肿瘤作用主要通过诱导细胞凋亡这个环节来实施。[结论]：两药协同的抗肿瘤效应在细胞周期的阻滞和诱导凋亡两个环节均有干预。主要通过诱导癌细胞凋亡发生抑瘤效应,对细胞周期的阻滞行为主要是干预S期,DNA的合成。