当异体器官植入机体后,移植物所携带的异体抗原刺激受者免疫系统,活化以细胞毒性T淋巴细胞为主的效应细胞的同时,具有调节功能的CD4⁺T细胞也被活化。本文主要探讨了CD4⁺CD25^highTreg在器官移植免疫耐受的机制和临床应用。一、鉴定器官移植后受者活化CD4⁺CD25^highT细胞的表型特征。经免疫磁珠法和CD4⁺CD25⁺Regulatory T分选试剂盒分选细胞得到受者外周血CD4^-、CD4⁺CD25^-、CD4⁺CD25⁺T细胞,应用流式细胞仪比较表面CD25表达强度。RT-PCR法检测和Western Blot检测其FoxP3 mRNA和蛋白的表达。结果发现:两色法流式细胞仪检测所分选到的CD4⁺CD25⁺细胞中94%为CD4⁺CD25^highTreg。分选得到三群细胞FoxP3 mRNA以CD4⁺CD25⁺T细胞最多,相对表达水平为1.2±0.1;依次是CD4⁺CD25^-T细胞为0.03±0.04;CD4^- T细胞为0.02±0.03;差异有统计学意义（P=0.00）。FoxP3蛋白相对表达水平以CD4⁺CD25⁺T细胞最多,为1.8±0.4;依次是CD4⁺CD25^-T细胞0.09±0.06;CD4^-T细胞为0.01±0.03;差异有统计学意义（P=0.00）。二、探讨器官移植后受者活化CD4⁺CD25^highTreg在器官移植免疫调节中的作用。应用流式细胞仪序列观察活体肾移植受者手术前后不同时间点外周血CD4⁺CD25^highTreg的变化;RT-PCR法检测FoxP3 mRNA的表达;免疫组化染色检测肝脏移植前后移植物CD4⁺CD25^highTreg FoxP3蛋白表达情况。以单向淋巴细胞培养系统,观察CD4⁺CD25^highTreg的功能特性和免疫调节特性。结果发现:移植后同种异体抗原诱导产生出功能性CD4⁺CD25⁺T细胞和CD4⁺CD25^highTreg;CD4⁺CD25^highTreg数量和FoxP3 mRNA表达量表达高于移植术前且与病程有关。移植后移植物内部有FoxP3⁺细胞表达,且在急性排斥反应时移植物内部表达更高。CD4⁺CD25^highTreg对CD4^-、CD4⁺CD25^-细胞的活化有剂量依赖性免疫抑制作用;1:8为临界点。三、探讨肾移植术后受者外周血CD4⁺CD25^highTreg与急性排斥反应的关系。定群研究62例首次肾移植受者,包括急性排斥反应33利、肾功能稳定者29名,比较外周血CD4⁺、CD8⁺T细胞和CD4⁺CD25^highTreg变化、CD8⁺T/CD4⁺CD25^highTreg细胞比值与急性排斥反应预后的关系。发现:急性排斥反应者外周血的CD4+^CD25^highTreg为（8.779±2.614）%、,高于肾功能稳定者,后者为（7.543±2.527）%,差异有统计学意义（P=0.03）;急性排斥反应者的CD8^-T/CD4⁺CD25^highTreg比值为9.229±3.826,肾功能稳定者为8.9±2.6,差异无统计学意义（P=0.97）。急性排斥反应的转归与外周血CD4⁺CD25^highTreg无关（P=0.38）,而与CD8⁺T/CD4⁺CD25^highTreg比值相关（P=0.01）。四、抗CD25单克隆抗体对肾移植受者外周血CD4⁺CD25^highTreg的影响。应用流式细胞仪、RT-PCR,序列比较应用抗CD25单克隆抗体前后,活体肾移植受者外周血CD4⁺CD25^highTreg细胞数量、功能及Foxp3 mRNA基因水平的变化;并与未使用抗体者比较。发现在肾移植术后的不同时间点抗体组受者的CD25⁺T细胞百分比明显低于对照组。抗CD25单克隆抗体一过性降低CD4⁺CD25^highTreg,与对照组比较,抗体组术后3、13天CD4⁺CD25^highTreg占CD4⁺T细胞的比例明显降低,术后17、27天恢复到对照组水平,无统计学差异。肾移植术后不同时间,两组受者外周血Foxp3 mRNA表达水平无统计学差异。与对照组相比,抗体组CD4⁺CD25^highTreg免疫抑制能力无明显变化。结论:1、移植术后活化CD4⁺CD25^highT具有调节性T细胞的表型特征,为CD4⁺CD25^highTreg。2、CD4⁺CD25^highTreg在器官移植术后被活化、并具有免疫抑制功能,且在移植物内部表达;表明其参与了免疫耐受的维持和诱导,可以作为临床诱导免疫耐受的一种治疗方法。3、急性排斥反应时CD4⁺CD25^highTreg上调,低CD8+T/CD4+CD25^highTreg比值可预测急性排斥反应的可逆转性。4、两剂100mg抗CD25单克隆抗体（赛尼哌）仅一过性的降低CD4⁺CD25^highTreg、并不会影响其活化扩增,同时也不影响免疫抑制和维持免疫耐受的能力。