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鲤鱼(Cyprinus carpio),原产于欧亚大陆,是世界上重要的水产养殖鱼类。为进一步分析研究鲤鱼转录组数据及其功能基因,我们构建了鲤均一化全长cDNA文库。本研究以1龄雌性鲤鱼的八种组织为材料,包括血液、鳃、卵巢、肝胰脏、头肾、体肾、心和脑组织,利用Cap-trapper法,制备成全长Uncut cDNA原始文库。对原始文库进行检测,文库总克隆数(CFU)为6.4×106,重组率大于95%。采用基因组DNA饱和杂交原理,对文库进行均一化处理,从而构建了鲤鱼均一化的全长cDNA文库,CFU为2×105,重组率大于95%,插入片段平均长度大于1.0kb,全长比例大于90%。qPCR检测表明,文库均一化后,β-actin丰度相对于均一化前降低了87倍。对均一化后的文库随机挑取43008个克隆,利用M13F(-20)通用引物进行5’端测序,成功测序并得到29779条序列。序列处理后聚类拼接,获得15116条非重复序列(unigene),并提交至NCBI数据库。对得到的unigene进行长度分布及GC含量分析,序列长度主要分布在300bp-700bp间,平均长度为540bp;GC含量分析表明鲤鱼基因cDNA序列中GC含量为45.53%。基于本地Linux平台,使用BLASTX与无冗余蛋白数据库(NR)进行比对分析,对8437条序列进行了注释,包括分子功能、生物学过程和细胞组分三个层次,其中细胞组分分为13个部分,分子功能分为12个部分,生物学过程分为22个部分。从本文库筛选出3个Rab1a基因,分别为Rab1a-1、Rab1a-2和Rab1a-3。应用鲤BAC文库对Rab1a-1和Rab1a-2进行全长测序及信息学分析,绘制出基因结构图;随后,对它们的蛋白二级及三级结构进行比对作图,并构建系统发育树;最后,分析了Rab1a-1和Rab1a-2在不同组织的表达,以及低氧条件下它们表达的差异并对功能进行初步研究。