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铁是人体生理代谢过程中不可缺少的必需营养元素之一。然而,由于饮食中铁含量水平低或铁的生物有效性低等原因,造成人体铁营养素缺乏,严重影响人体的生理和心理机能。铁蛋白(Ferritin)是一种广泛存在于生物体中的可以贮存铁离子的贮藏蛋白,调控铁元素的吸收和释放。玉米(Zea mays L.)的种植面积在我国居第一位,是主要的粮食、饲料作物之一,其种子中三倍体胚乳占其籽粒总重量的80%-85%,是主要的食用部位。本研究使用农杆菌介导的遗传转化方法将重组载体pCUB-Zein∷Ferritin导入玉米,期望在玉米胚乳特异表达基因15kDβ-Zein启动子的调控下,使大豆铁蛋白Ferritin基因玉米玉米籽粒中特异表达,提高籽粒铁含量,为改良玉米营养品质,解决以玉米为主食人群的缺铁问题提供帮助。 主要结果如下: 1.分离Zein∷Ferritin片段,基于pCUB植物表达载体构建pCUB-Zein∷ Ferritin,并通过菌液PCR、质粒PCR、酶切及测序等方法加以验证。 2.采用冻融法将植物表达载体pCUB-Zein∷ Ferritin转化农杆菌菌株LBA4404,经农杆菌菌液PCR检测,表明表达载体已成功导入农杆菌LBA4404。 3.农杆菌介导法转化玉米自交系齐319和郑58的茎尖,对除草剂(草铵磷)抗性植株的基因组DNA进行PCR检测,转化率分别为3.6%和0。 4.从20个受体材料为齐319的T0代阳性株系中选取1000粒种子,仅有672粒种子发芽,PCR检测T1代植株共获得12株阳性植株,阳性率为1.19%。 本研究通过生物技术方法,使玉米胚乳特异表达大豆铁蛋白,为培育富铁玉米品种,解决人体铁营养元素缺乏奠定研究基础。