大肠杆菌sRNA EsrE的转录调控研究

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shiyilang7879
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大肠杆菌sRNA EsrE可以维持细胞在有氧条件下的正常生长,固体平板上的生长形态以及对不同抗生素的敏感性等多种表型,并且参与辅酶Q8的合成。实验室前期对于esrE基因的转录调控进行了初步的探索,识别多个顺式调控元件,并在此基础上筛选得到54种潜在的转录调控因子,本研究主体内容是验证潜在转录调控因子对EsrE调控功能并明确其调控机制。研究中首先完善了实验室前期构建的双质粒报告基因(lacZ)系统,并利用该系统逐一验证了潜在转录调控因子的调控功能,研究结果表明FabZ与RpoH可以调控EsrE的转录。FabZ为脂肪酸生物合成中的β-羟酰-ACP脱水酶,双质粒系统表明其可下调EsrE的转录,进一步的凝胶阻滞实验分析发现,其不能直接和EsrE启动子区域的DNA片段结合,即其不具有DNA结合活性,故关于FabZ如何精确调控EsrE的转录还有待研究。RpoH为RNA聚合酶的σ亚基,双质粒系统的实验结果表明RpoH能上调EsrE的转录,而凝胶阻滞实验分析发现,该蛋白在RNA聚合酶核心酶的协同作用下能直接和EsrE启动子区域的DNA片段结合,即RpoH能以RNA聚合酶σ亚基形式启动EsrE的转录。基于RpoH能直接启动EsrE的转录,而RpoH能响应热休克刺激,随后探究了热休克刺激是否影响大肠杆菌EsrE的转录,通过体内报告实验及RT-qPCR分析证明热休克刺激确实能影响EsrE的转录。综上所述,本工作确定了参与EsrE转录的σ因子为RpoH,且EsrE能响应热休克压力刺激,这些研究结果加深了我们对EsrE调控功能的认知。
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