小鼠胚胎脐血管的造血功能研究

来源 :第三军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sanhaijin123
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目的:脐血管是胚胎造血发育过程中一重要的造血器官,同AGM区,胎盘和胎肝类似,均可产生成体型造血干细胞,尤其是脐血管同AGM区一样,都是最早的造血干细胞产生位点,且均为大血管组织。AGM区的造血发生和发育模式,近年来是众多研究者关注的重点,包括其造血细胞的发育和调控等多个方面。然而,长期以来关于脐血管区各类造血干祖细胞的特征及其具体细胞来源却仍有很多未知。我们的研究主要从脐血管区造血干细胞的的发生模式,造血祖细胞的发育特征,体外干、祖细胞的维持等多个方面考察脐血管区造血发育的特征,从而发掘其造血发育上的特征,为全面揭示胚胎造血发育的本质特征提供重要的理论依据。方法:我们的研究采用AGM区来源的血液血管干细胞模型,即优化的BL-CFC模型,来考察脐血管区是否存在真正的血液血管干细胞;采用直接体外造血CFU-C分化来考察血液血管干细胞的髓系分化能力;采用与OP9基质细胞共孵育的实验方法考察其淋系造血分化能力;采用体外直接诱导或者借助OP9基质细胞诱导的方法考察其血管分化特征。并且,我们用免疫磁珠分选的方法将脐血管区血液血管干细胞进行了细胞群体的定位。最后,采用组织块培养的实验方法考察了脐血管区各类造血干祖细胞的体外维持和扩增特征。结果:小鼠胚胎AGM区、脐血管和胎盘均可在体外分化产生各系造血祖细胞,总的CFC数目胎盘最多,其次是脐血管和AGM区。小鼠胚胎脐血管区细胞在体外半固体培养体系中,可以形成典型的Blast样集落,形态特征与AGM区来源的BL-CFC相类似;这种典型的Blast集落细胞用瑞氏-姬姆萨染色可见包含多个核浆比较高的原始细胞;流式细胞计数分析显示:较早期造血祖细胞的CD31/c-Kit双阳性细胞的比例为:32.5%;另外两组造血祖细胞的标志:Sca-1/CD45、CD31/CD45双阳性细胞分别占:16.4%和41.2%;而较成熟一些的巨噬细胞(F4/80)和红系(Ter-119)分化比例分别为:18.6%和33.3%;在体外可以分化产生各系造血CFU-C;在OP9基质细胞上可以分化产生B淋巴细胞;吞噬LDL,并且在OP9基质细胞上可以形成CD31+或者endomucin+网络状血管样结构;体外诱导分化比较显示:AGM区可以在OP9上形成70%的管样结构,而脐血管则只能形成25%的管样结构;脐血管区BL-CFC集落在胚胎近端和远端的数目无差异;组织分析显示:同样可以产生造血集落的胎盘没有BL-CFC的存在;细胞定位分析显示脐血管区BL-CFC特异性表达Tie2而不表达PDGFRβ。体外组织块孵育后的脐血管区仍然可以分化产生各系造血祖细胞和BL-CFC,并且保留了其造血干细胞的功能,可以重建受致死剂量照射小鼠的造血系统。结论:小鼠胚胎脐血管区存在BL-CFC,即证明了血液血管干细胞也是脐血管区造血发生的一种重要模式;脐血管区的BL-CFC均匀分布于近端和远端;主要分布在Tie2+的内皮细胞亚群,而不是PDGFRβ+的间质细胞群中;小鼠胚胎脐血管区组织块孵育后可以产生各系造血CFC、BL-CFC和造血干细胞。
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