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目的:通过建立稳定转染RBM5基因的A549细胞系,观察RBM5基因过表达对A549细胞增殖以及DHX15表达的影响,为肺癌基因治疗提供理论依据。 方法: ①应用PCR技术从人睾丸cDNA中分两段扩增RBM5基因的开放阅读框(ORF),将RBM5基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中; ②将测序验证后的重组质粒pcDNA3.1(+)/RBM5转染肺腺癌细胞A549,经G418筛选出RBM5基因过表达阳性细胞株并采用Western Blot检测对阳性细胞进行鉴定,流式细胞法检测RBM5基因过表达对肺腺癌细胞A549细胞周期的影响; ③运用RT-PCR技术检测RBM5基因过表达A549细胞株中剪接相关因子DHX15的表达情况。 结果: ①成功构建出pcDNA3.1(+)/RBM5真核表达载体,建立了稳定转染RBM5基因的A549细胞系并筛选出RBM5基因过表达阳性细胞株; ②重组质粒pcDNA3.1(+)/RBM5转染组细胞较空白质粒pcDNA3.1(+)转染组细胞增殖缓慢,处于G1期细胞比例增大,S期细胞比例减小; ③RBM5基因过表达A549细胞株中DHX15表达上调。 结论:我们的研究显示 ①RBM5基因过表达可抑制肺腺癌细胞A549增殖,进一步验证了RBM5基因的肿瘤抑制作用; ②RBM5基因过表达可使DHX15表达上调。