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第一部分脊髓星形胶质细胞的原代培养和鉴定目的：体外分离、培养、鉴定脊髓来源的星形胶质细胞，获取高纯度脊髓星形胶质细胞。方法：取新生（1-2天）SD大鼠，断头处死，酒精浸泡消毒，切开皮肤皮下组织，用显微外科镊打开全长椎板，取出脊髓，小心去除硬脊膜，用剪刀将脊髓组织剪成乳糜状，0.25%胰蛋白酶消化5-10min成细胞悬液，加入含10％的胎牛血清的DMEM培养基终止消化。1500转/分离心5min，加入培养基轻轻吹匀，用200μM的过滤网过滤，按5×10~5个细胞/ml的密度接种于培养瓶内。置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。结果：原代培养所得到的细胞形态、状态良好；分离培养的脊髓星形胶质细胞采用免疫荧光GFAP和DAPI双染的方法进行鉴定，结果显示超过95%的细胞胞浆区GFAP染色阳性。结论：脊髓来源星形胶质细胞的体外分离、提取和培养操作简便易行，所获取的脊髓星形胶质细胞纯度高。第二部分FTY720诱导脊髓星形胶质细胞凋亡的机制研究目的：探讨FTY720对星形胶质细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法：原代培养的大鼠脊髓星形胶质细胞传代至3-4代，用不同浓度的FTY720处理。应用CCK8检测试剂盒检测细胞活力，Hoechst33342荧光染色和流式细胞技术检测星形胶质细胞的凋亡；应用Western blot检测Caspase-3、 Cleved-caspase-3、JNK、P-JNK、Bax、Bcl-2、Cyt c和caspase-9等蛋白的表达含量。用SP600125预处理星形胶质细胞后，观察FTY720对星形胶质细胞活力、细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达含量的影响。结果：（1）FTY720抑制星形胶质细胞的细胞活力并诱导细胞凋亡，呈剂量依赖性，ED50为10μM。（2）FTY720上调脊髓星形胶质细胞中Cleaved-caspase-3、P-JNK、胞质内Cyt c、Bax和Cleaved caspase-9等促凋亡蛋白的表达水平，而下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。（3）用SP600125预处理可显著降低FTY720诱导的脊髓星形胶质细胞的活力降低和细胞凋亡。（4）SP600125预处理可显著减少FTY720诱导的Caspase-3的剪切活化，使Cleaved-caspase-3的表达含量减少。（5）SP600125预处理脊髓星形胶质细胞，可显著下调FTY720诱导的P-JNK、Bax和Cyt c等促凋亡蛋白的表达水平，而上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。结论：FTY720可诱导脊髓星形胶质细胞的凋亡；FTY720可能通过JNK和线粒体凋亡相关蛋白而诱导脊髓星形胶质细胞的凋亡。