目的：重症急性胰腺炎(SAP)属病理分型的急性出血坏死型胰腺炎(AHNP)，本病起病急，病情凶险，死亡率高，由于SAP的发病机制至今尚未阐明，临床上仍无卓有成效的治疗方案。银杏苦内酯B(GinkgolideB，代号为BN52021)为“国宝”银杏叶提取物中非常重要的有效成分之一，对SAP具有治疗作用，是炎性介质血小板活化因子(PAF)的强拮抗剂，具有抗炎、抗血栓和抗休克形成等多种药理作用，但是其治疗机理不清楚。本实验以Wistar大鼠SAP模型为对象，以肉眼观察、病理切片和血浆淀粉酶的检测为手段，通过比色法和westernblot技术来观察和检测分泌型磷脂酶(sPLA2)和核转录因子KBp65(NF-KBp65)表达的变化，探讨sPLA2和NF-KBp65在BN52021治疗大鼠SAP时的作用和机制，为我国研究、开发和应用BN52021提供理论和实验依据。 方法：本实验选取清洁级的200-250g的雄性Wistar大鼠180只，随机分为SAP模型组(SAP,n=60)、BN52021治疗组(BN,n=60)和阴性对照组(NC,n=60)，三组又随机分为1h、2h、3h、6h、12h和24h六个小组，每小组为十只，动物模型的制作参照Aho的方法。开腹后，SAP组和BN组用微量注射器逆行胰胆管内注射5％牛磺胆酸钠(0.1mL/100g)，推注速度0.20mL/min，推药后用无创血管夹夹住胰胆管入十二指肠处，观察10min，记录胰腺及周围组织器官的变化，去除血管夹，确认腹腔内无活动性出血后，两层关腹并用无菌纱布覆盖伤口，NC组开腹后仅翻动十二指肠并触摸胰腺数次。术后15minNC组、SAP组股静脉注射生理盐水；BN组股静脉注射BN52021(5mg/kg)。各组大鼠术后均自由饮水、禁食。模型建立后，各组在1h、2h、3h、6h、12h和24h点分别取十只大鼠开胸和开腹，观察记录胰腺及周围组织器官的变化，右心房抽取静脉血，37℃水浴10min后3000g/min离心10min,取上清于消毒过的EP管中，-20℃冰箱保存；在腹腔迅速取一部分胰腺组织，液氮中过夜后于-80℃冰箱冻存备用；另一部分胰腺组织于40g/L中性缓冲甲醛固定，石蜡包埋切片后HE染色制片，观察病理学变化；用全自动生化仪和淀粉酶试剂盒检测血浆淀粉酶；用全自动酶标仪和sPLA2试剂盒检测血浆sPLA2；用免疫印迹法(wsternblot)测定胰腺组织NF-KB的P65蛋白，并用Image-ProPlusVersion5.0forwindowsTM图像分析系统进行定量分析。所有数值均用(x)±s表示，在不同时间点，SAP组、BN组和NC组3组间的比较用一般线性模型中单因素方差分析的LSD法，以P＜0.05作为显著性差异的水准。全部数据的统计处理均采用SPSS11.5forwindows分析软件。 结果：1肉眼和光镜所见：SAP组随着时间的推移，胰腺及周围组织水肿、出血和坏死面积逐渐扩大，程度逐渐加重，胸腹腔积液也增多，而BN组较SAP组的组织结构破坏相对较轻，NC组胰腺及周围组织结构始终大致正常。血浆淀粉酶检测显示：在各时间点，SAP组与NC组相比较显著升高(P＜0.05)，BN组也较NC组显著升高(P＜0.05)，但BN组在1h,2h,3h,6h和24h较SAP组显著降低(P＜0.05)。这些说明SAP动物模型制作是成功的，BN52021也有一定的治疗效果。 2血浆sPLA2的检测显示：在6h,12h和24h时间点，SAP组较NC组显著升高(P＜0.05)，在1h、2h和6h时间点，BN组也较NC组显著升高(P＜0.05)；但在BN组和SAP组，除在1h有显著性差异外(P＜0.05)，其余各个时间点均无显著性差异(P＞0.05)。 3胰腺组织中NF-KBp65的westernblot半定量显示：在造模成功后的1h,3h和6h这三个时间点，NF-KBp65的表达明显增加并达到高峰，这时SAP组较NC组显著升高(P＜0.01)，BN组较SAP组显著降低(P＜0.05)，但其余时间点(2h,12h和24h)BN组较SAP组无显著性差异(P＞0.05)。 在各个时间点，SAP组较NC组有显著性差异(P＜0.05)，BN组较NC组有显著性差异(P＜0.05)。 结论：1逆行胰胆管内注射5％牛磺胆酸钠可以成功制备大鼠SAP模型。BN52021对其血浆淀粉酶活性的显著升高有缓解作用。 2在SAP的发生发展中，sPLA2和NF-KBp65起了重要的作用，二者间相互激活，相互作用，相互促进，从而影响了SAP的病程和预后。 3BN52021对大鼠的SAP后的血浆sPLA2活性和胰腺组织NF-KBp65的表达活性的显著升高有缓解作用，并能在SAP不同的病理阶段不同程度的减少SAP时胰腺及其余各脏器的损伤，从而抑制SAP的发展。