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目的:1、建立滤纸辅助细胞膜(Cell membrane-coated filter papers,CMFPs)垂钓的方法,应用于筛选天然产物中潜在的活性成分,为新药研发提供新方法。2、从西兰花种子中提取萝卜硫素(Sulforaphane,SFN),为做成SFN制剂提供前期准备。方法:以兔红细胞为原材料,用低渗溶胀法获取红细胞膜(Cell membranes,CMs)。以物理吸附的原理,将CMs固定于滤纸上。通过CMs溶液固定前后的差值,优选出固定CMs量最大的滤纸。通过异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)和细胞膜红色荧光探针(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethy-lindocarbocyanine perchlorate,Di I)对CMs染色,在倒置荧光显微镜下观察CMs,CMFPs和滤纸的荧光,确定CMs可以被固定在滤纸上。以维拉帕米,硫脲混合药液对CMFPs垂钓法进行选择性评价。将CMFPs应用于垂钓白芷药液中的潜在活性成分,与CMs垂钓的方法进行比较,并对活性成分进行网络药理学研究和分子对接评价。对于SFN制剂的前期准备,需要提取出SFN,根据文献报道,在西兰花种子SFN含量最高,通过水解的方法提取SFN粗品,利用高效液相法对其进行鉴定,使用硅胶柱层析法对SFN粗品进行纯化,获得SFN纯品,对其进行质谱分析,并利用高效液相的方法测定其种子中SFN的纯化得率。结果:我们根据CMs溶液在固定前后的CMs量的差值比较,发现Grade 2滤纸固定的CMs量最大,通过对被染色的CMs,CMFPs和滤纸在倒置荧光显微镜下的观察,发现CMs被成功固定于滤纸上。CMFPs与维拉帕米,硫脲混合药液孵育后的色谱图中,证明其可以与混合药液中的维拉帕米进行特异性结合,与硫脲无相互作用,因此CMFPs垂钓法具有选择性。在CMFPs和白芷提取液孵育的色谱图结果中,可以发现从中垂钓出三种化合物,运用液质联用分析出结构,并使用网络药理学和分子对接的方法对其进行分析,分析得出垂钓出三种成分可能可以与CMs表面γ-氨基丁酸受体亚基α-1(Gamma-aminobutyric acid receptor subunit alpha-1,GABRA1)蛋白特异性结合的潜在活性成分。使用CMs垂钓法重复了选择性评价和在白芷中垂钓,发现色谱图中的杂质峰较多,并且操作较为复杂,耗时耗力。我们通过水解法提取了SFN粗品,通过高效液相法分析,SFN粗品和SFN标准品进行比较,SFN粗品中存在和标准品相同的峰,通过不同的水解条件,发现p H值为5时,SFN提取量最多,通过硅胶柱层析法进行纯化,其纯度超过标准品,西兰花种子中SFN纯化得率为0.28%,并通过质谱证明纯化物为SFN。结论:我们优选出固定CMs量最大的滤纸类型,并成功证明了CMs被固定于滤纸上。通过维拉帕米和硫脲的选择性评价,证明了CMFPs可以与阳性药物特异性结合,CMFPs垂钓法可以用于筛选天然产物中的活性成分。并与CMs垂钓法比较具有一定优势。将CMFPs垂钓法应用于天然产物白芷药液中活性成分的筛选,成功筛选出三种活性成分,为筛选天然产物中潜在的活性成分提供新方法,也为新药研发提供了新思路。我们选用了水解法从西兰花种子中粗提取了SFN,通过与标准品比较证明提取出的是SFN,通过硅胶柱层析法对SFN粗品进行纯化,并对其进行了质谱鉴定,测定西兰花种子中SFN纯化的纯化得率,为制备SFN制剂提供了前期准备。