卵巢癌是我们在妇科日常的临床工作中最经常遇见的恶性肿瘤之一,发病率位于宫颈癌与子宫内膜癌之下,但由于缺乏有效的早期诊断方法且卵巢癌具有易播散转移、早期患者无明显症状等特点,发现时大多数已处于晚期,因此其病死率较高。对于卵巢癌的治疗方案在不断改进,肿瘤细胞减灭术加上铂类与紫杉醇联合化疗可改善卵巢癌患者疗效,但总的5年生存率仍徘徊在30%-40%。因此研究卵巢癌发生发展的相关机制、寻找新的有效治疗靶点,改善预后仍然是卵巢癌研究的重点和难点。自噬,是继凋亡后发现的细胞内物质代谢的一条重要途径,被称作“II型程序性细胞死亡”,目前许多研究发现自噬调控机制的失活与多项器官组织肿瘤的发生发展密切相关。Atg5(Autophagy related gene 5,自噬相关基因5)是自噬过程中发挥重要作用的基因,在自噬体的形成过程中,须要Atg5-Atg12-Atg16L结合系统和Atg8-PE结合系统两个类泛素化蛋白质系统介导,Atg5与Atg12形成的共价复合物,定位于自噬体膜表面利于自噬体膜的伸张,促进自噬体的形成,是自噬体形成所必须的重要因素。Beclinl(BECNI)是一种与自噬有关的抑癌基因,有研究提示BECNI的等位基因的缺失导致自噬活性减弱从而促进肿瘤的发生。目前研究显示Beclin1基因编码的蛋白与Ⅲ型PI3K(phosphatidylinositol 3,kinase,磷脂-3-羟激酶)形成一个复合体,调控Atg1、Atg3等其他Atg蛋白定位于自噬前体结构中,因而能够调控自噬的活性。基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因之一,可以分为野生型p53(wildtypep53)和突变型p53(mutanttypep53)两种类型,wp53蛋白非常不稳定半衰期很短(20-60min),而且含量极低,因此我们平常所采用的免疫组化方法检测到的p53为突变型p53,是基因突变的产物。野生型p53通过编码转录因子蛋白、抑制细胞增殖、诱导凋亡及促进细胞分化成熟达到抑制肿瘤的作用。突变型p53除了干扰野生型p53的抑癌作用外,还与其他致癌基因相互作用促进肿瘤的发生发展。本研究采用免疫组织化学及rt-pcr技术检测atg5、beclin1及p53在上皮性卵巢癌、良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中的表达情况,分析其与卵巢癌患者临床病理因素的关系及三者表达的相关性,探讨三者在卵巢癌发生发展过程中的作用,为更深一步了解卵巢癌发生进展的分子机制、判断卵巢癌患者预后情况提供理论支持,更为指导临床治疗提供新的思路。目的检测自噬相关基因atg5、beclin1与p53在上皮性卵巢癌、良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织的表达情况,探讨其与卵巢癌发生、发展的相关性及意义,为研究卵巢癌的发病机制及治疗提供新的方向。材料及方法1.研究对象:收集郑州大学第三附属医院和郑州大学第一附属医院2013年9月-2015年6月住院因各种原因行手术切除卵巢的84例标本,将其分为三组:恶性组:上皮性卵巢癌标本34例(浆液性卵巢癌18例、粘液性卵巢癌10例、其它类型卵巢癌6例);年龄22-78岁,平均年龄51岁;按国际妇产科(figo2000)临床分期及病理分级标准:i期5例;ii期9例;iii期9例;iv期11例;病理学分级:g19例;g211例;g314例;有淋巴转移18例、无淋巴转移16例。良性组:良性卵巢肿瘤组织25例。正常组:正常卵巢组织25例,正常卵巢组织取自因乳腺癌去势手术、子宫肌瘤、卵巢非瘤样囊肿等疾病行子宫及单/双附件切除者的卵巢。标本均取自第一次手术,经两位以上病理学老师双盲证实,术前都没有接受放疗、化疗。2.研究方法:应用免疫组织化学sp法和rt-pcr(实时定量-多聚集链反应半定量法realtime-polymerasechainreaction)技术检测25例正常卵巢组织、25例良性卵巢肿瘤组织及34例上皮性卵巢癌组织中atg5、beclin-1及p53蛋白和mrna的表达,并结合临床病理因素进行分析。3.统计学方法:应用spss18.0统计软件分析实验所得数据。计量资料用sx?表示,恶性组、良性组、正常组atg5、beclin1、p53mrna表达的定量比较采用单因素方差分析,两两比较采用lsd-t检验;免疫组织化学结果的定性资料分析采用?2检验;相关性分析采用pearson列联相关,检验水准为α=0.05。组间两两比较:检验水准α=α/比较次数=0.0167。结果1.atg5在恶性组、良性组及正常组的mrna的相对表达量分别为:0.256、0.514、0.613;atg5蛋白在恶性组、良性组及正常组的阳性表达率分别为:20.6%(7/34)、60%(15/25)、88%(22/25)。atg5的mrna及蛋白阳性表达率从正常组、良性组、恶性组表达依次降低,其差异均具有统计学意义(p<0.05)。2.beclin1在恶性组、良性组及正常组的mrna的相对表达量分别为:0.234、0.536、0.624;beclin1蛋白在恶性组、良性组及正常组的阳性表达率分别为:26%(9/34)、60%(15/25)、92%(23/25)。beclin1的mrna及蛋白阳性表达率从正常组、良性组、恶性组表达依次降低,其差异均具有统计学意义(p<0.05)。3.p53在恶性组、良性组及正常组的mrna的相对表达量分别为:0.843、0.252、0.236;p53蛋白在恶性组、良性组及正常组阳性表达率分别为:76%(26/34)、12%(3/25)、4%(1/25)。p53的mrna及蛋白阳性表达率在恶性组中表达高于良性组和正常组,差异具有统计学意义(p<0.05),其在良性组及正常组的表达差异无统计学意义(p>0.05)。4.在上皮性卵巢癌组织中,atg5、beclin1及p53的蛋白表达与患者临床及病理分期有关(p<0.05),随着临床与病理分期的进展,atg5、beclin1蛋白表达越低,p53蛋白表达越高,而与患者年龄、病理类型及淋巴转移无关(p>0.05)。5.在上皮性卵巢癌组织中,atg5与beclin1的蛋白表达呈正相关(r=0.461p<0.05),p53的蛋白表达与atg5、beclin1的蛋白表达均呈负相关(r=0.495p<0.05;r=0.542p<0.05)。结论1.Beclinl和Atg5在上皮性卵巢癌组织中低表达、P53在上皮性卵巢癌组织中高表达,参与上皮性卵巢癌的发生发展过程。2..在上性卵巢癌组织中,Atg5与Beclin1表达呈正相关,Atg5、Beclin1与P53表达呈负相关,三者协同参与上皮性卵巢癌的发生发展。