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背景高危型人乳头瘤病毒(high risk-human papillomaviruses, HR-HPVs)与宫颈癌存在病因学关系,其早期基因E6的持续表达是其致癌的重要因素。锌指蛋白(zinc finger protein, ZNF)家族与多种肿瘤的发生与演进密切相关,ZNF84是ZNF家族重要成员之一。本课题组经Agilent人基因表达谱芯片分析,发现沉默E6表达后,ZNF84基因表达下调。HPV16 E6与ZNF84的关系尚不清楚。目的以HPV16 E6表达阳性的宫颈鳞癌组织、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)组织、宫颈鳞状上皮组织、宫颈癌细胞株(宫颈癌SiHa细胞)以及HPV16 E6表达阴性的宫颈鳞癌组织、CIN组织、宫颈鳞状上皮组织、宫颈癌细胞株(宫颈癌C33-A细胞)为研究对象,研究ZNF84在HPV16相关宫颈癌发生与演进中的表达及作用,为进一步研究HPV16相关宫颈癌防治措施提供科学依据。方法1.通过Western blotting方法检测ZNF84在宫颈癌SiHa细胞(HPV16 E6表达阳性)和宫颈癌C33-A细胞(HPV16E6表达阴性)中的表达。2.通过免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)染色方法检测ZNF84在HPV16E6表达阳性的宫颈鳞状上皮组织、CIN组织、宫颈鳞癌组织和HPV16 E6表达阴性的宫颈鳞状上皮组织、CIN组织、宫颈鳞癌组织中的表达,并分析二者之间表达的关系。3. 设计以ZNF84 mRNA为靶点的短发夹RNA (short hairpin RNA, shRNA)序列,构建pGenesil-1-shRNA-ZNF84重组质粒和含无关序列的pGenesil-1-shRNA-vect对照质粒。4.经脂质体介导将上述质粒分别转入HVP16 E6表达阳性的宫颈癌SiHa细胞,其中转染pGenesil-1-shRNA-ZNF84重组质粒的SiHa细胞命名为SiHa-shRNA-ZNF84细胞,转染pGenesil-1-shRNA-vect对照质粒的SiHa细胞命名为SiHa-shRNA-vect细胞。筛选鉴定后,通过Transwell迁移和侵袭实验等观察HPV16 E6表达阳性的宫颈癌SiHa细胞在ZNF84表达沉默后迁移和侵袭能力的变化。结果1. Western blotting结果显示：HPV16 E6在宫颈癌C33-A细胞中不表达,而HPV16 E6在宫颈癌SiHa细胞中呈阳性表达。ZNF84在HPV16 E6表达阴性的C33-A细胞和HPV16 E6表达阳性的SiHa细胞中均呈阳性表达,但C33-A细胞中ZNF84的表达显著低于SiHa细胞(P<0.01)。2.IHC结果显示：ZNF84在HPV16 E6表达阳性的宫颈鳞状上皮组织、CIN组织和宫颈鳞癌组织中的表达均分别显著高于其在HPV16 E6表达阴性的宫颈鳞状上皮组织、CIN组织和宫颈鳞癌组织中的表达,二者表达呈正相关(P<0.01)。3. 以ZNF84 mRNA为靶点的shRNA对宫颈癌SiHa细胞中ZNF84表达的沉默效应。Western blotting方法检测各组细胞中ZNF84表达(以(3-actin为内参照)的结果显示：ZNF84在SiHa-shRNA-ZNF84细胞中的表达显著低于其在SiHa细胞和SiHa-shRNA-vect细胞中的表达(P<0.01),沉默效率为：95.630%。与SiHa细胞相比,ZNF84在SiHa-shRNA-vect细胞中的表达无明显差异(P>0.05)。4.ZNF84表达沉默对HPV16 E6表达阳性的宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭能力的影响,Transwell迁移和侵袭实验的结果均显示：SiHa-shRNA-ZNF84细胞穿过小室底膜的细胞数显著少SiHa-shRNA-vect细胞(P<0.01)结论1.证明了E6和ZNF84在HPV16 E6表达阳性和阴性的宫颈癌细胞株和不同病变阶段宫颈组织中的表达呈正相关。2.ZNF84表达沉默对HPV16 E6表达阳性的宫颈癌SiHa细胞的迁移和侵袭能力具有抑制作用。