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双生病毒是一类世界范围内广泛发生的植物单链环状DNA病毒,已在多个国家和地区的多种重要经济作物上引起严重危害,且近年来有逐年加重的趋势。我国云南,双生病毒引起的烟草病害在局部田块达70%以上。本论文对云南烟草曲叶病毒(TobaccoleafcurlYunnanvirus,TbLCYNV)的基因组结构及致病性进行了研究。
测定了Y136和Y143分离物的血清学特性及病毒基因组结构,其全序列非常相似(核苷酸序列同源性高达99%),它们与我国云南烟草曲叶病毒Y3分离物(TbLCYNV-Y3)的核苷酸序列同源性最高(98-99%),而与其它病毒的同源性都在82%以下,说明Y136和Y143是云南烟草曲叶病毒的两个分离物,并认为它可能是由烟草曲茎病毒(Tobaccocurlyshootvirus,TbCSV),云南南瓜曲叶病毒(SquashleafcurlYunnanvirus,SLCYV),AYVV,马来西亚番茄曲叶病毒(TomatoleafcurlMalaysiavirus,ToLCMV)及另一未知病毒重组后形成的。
云南烟草曲叶病毒的所有田间分离物都仅分离到类似DNA-A的分子,未检测到DNA-B。对其可能伴随的卫星DNAβ分子进行研究发现,只有Y136和Y143分离物伴随DNAβ分子,且伴随多个DNAβ分子。序列比较和进化分析发现,这7个DNAβ分子分为2个类型(Ⅰ和Ⅱ),且分别与中国番茄黄化曲叶病毒(TomatoyellowleafcurlChinavirus,TYLCCNV)(98.8-99.3%)和泰国番茄黄化曲叶病毒(TomatoyellowleafcurlThailandvirus,TYLCTHV)(99.4-99.6%)伴随的DNAβ分子具有很高的同源性和密切的进化关系。
构建了TbLCYNV-Y143、其同源及异源DNAβ分子的侵染性克隆。农杆菌接种及粉虱传毒试验证实TbLCYNV单独可以侵染本氏烟、心叶烟、矮牵牛、三生烟,并产生叶片上卷、叶脉增厚、植株矮化等典型的病害症状。Southern印迹检测表明同源及异源DNAβ不影响TbLCYNV的积累量。说明TbLCYNV为单组份begomoviruses,其类似DNA-A分子即能诱导病毒病症状,DNAβ对于TbLCYNV的系统侵染没有明显的促进作用。