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蜂胶是蜜蜂从植物幼芽、树皮与树干裂缝上采集树脂,并混入其上颚腺分泌物和蜂蜡加工而成的具芳香气味的胶状固体物。由于蜂胶植物来源广泛,化学成分复杂,使其具有多种药理活性,同时也给蜂胶的质量控制带来很大麻烦。
蜂胶具有广泛的药理活性,现已广泛应用于食品、饮料行业及医疗中。有研究表明,随着储存时间延长,蜂胶内的总黄酮和多酚含量明显下降,药理活性降低。目前,蜂胶质量控制标准只强调总黄酮含量的高低,对于从蜜蜂采集树脂到制成各种蜂胶制剂销售,蜂胶的化学组成是否发现变化尚没有研究,对蜂胶原料新鲜程度更没有相关的规定。
在温带地区,蜂胶的植物来源主要以杨属及其杂交属的芽苞分泌物为主。在这些地区采集的蜂胶的化学成分与杨树芽的成分极其相似。由于蜂胶生产受植物来源、季节、气候条件以及生产过程中多种因素影响,产量相对有限。蜂胶原料的供不应求使得市场上出现了在蜂胶中掺入杨树胶(杨树芽提取物)或直接以杨树胶冒充蜂胶的现象。杨树胶在颜色、气味、形状上都与蜂胶十分相似,而我国现有的蜂胶质量标准无法区分蜂胶与杨树胶。
蜂胶中所含化学成分有三个来源:蜜蜂采集回来的植物分泌物,蜜蜂代谢的分泌物以及在蜂胶采集加工过程中加入的物质。为了解决上述问题,我们从蜂胶是动植物双源产品入手,一方面研究蜜蜂在采集蜂胶过程中加入的腺体分泌物以及这些分泌物在蜜蜂将树脂转化为蜂胶过程中所起的作用,首次在蜂胶中检测到了β-葡萄糖苷酶活力,并探索了该酶与蜂胶新鲜度的关系;另一方面,构建了区分蜂胶与杨树胶的HPLC指纹图谱,首次确定了水杨苷作为蜂胶真假鉴别的指标。具体研究结果如下:
1.优化了蜂胶中β-葡萄糖苷酶提取和测定条件。新鲜蜂胶样本中均检测到β-葡萄糖苷酶活力,而随机购买的蜂胶样本中未检测到β-葡萄糖苷酶活力。将新鲜蜂胶于-20℃、4℃和室温下分别储存,结果表明:在-20℃、4℃下储存高达3个月的新鲜蜂胶没有明显的β-葡萄糖苷酶活力损失;4℃下储存的新鲜蜂胶β-葡萄糖苷酶活力呈线性缓慢下降;室温下储存的新鲜蜂胶酶活力呈现指数迅速下降。因此,提出蜂胶中β-葡萄糖苷酶活力高低可能是蜂胶新鲜度的指标。
蜂胶中的β-葡萄糖苷酶能够水解p-硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷和p-硝基苯酚-β-D-半乳糖苷,但不能水解p-硝基苯酚-β-D-葡萄糖醛酸、p-硝基苯酚-β-D-纤维二糖苷、苦杏仁苷、纤维二糖和龙胆二糖。说明蜂胶中β-葡萄糖苷酶只能水解芳香基-β-单糖苷,不能水解芳香基β-二糖苷以及β-二糖。
2.采用高效液相色谱法(HPLC)研究蜂胶中β-葡萄糖苷酶对类黄酮单糖苷及二糖苷的水解作用,探讨苷元结构和糖基的连接部位对酶水解作用的影响。结果表明:蜂胶中β-葡萄糖苷酶粗酶提取液可以水解槲皮素3-O-葡萄糖苷、槲皮素7-O-葡萄糖苷、芹菜素7-O-葡萄糖苷、木樨草素7-O-葡萄糖苷,而不能水解芦丁和柚配基7-O-葡萄糖鼠李糖苷。β-葡萄糖苷酶粗酶对类黄酮单糖苷的水解速度取决于类黄酮苷元的结构和糖基的连接部位。
3.采用HPLC指纹图谱研究蜂胶与杨树胶的差异,建立了区分蜂胶与杨树胶的指纹图谱方法。该方法以蜂胶和杨树胶水溶性物质为研究对象,不同来源蜂胶指纹图谱极其相似,但与杨树胶的图谱有十分明显的差异。不同地区蜂胶样本中有2个共有峰是杨树胶中不具有的特征指纹峰,而不同来源杨树胶中有3个共有峰是蜂胶中不具有的特征指纹峰,而且这5个特征峰明显,相互间没有干扰,易鉴别,可用于鉴定蜂胶与杨树胶,以及蜂胶中是否掺有杨树胶。
4.首次建立了以水杨苷为指标的蜂胶与杨树胶HPLC指纹图谱。采用该方法,所有蜂胶样本中均没有检测到水杨苷,而所有随机购得的杨树胶中均检测到水杨苷。除了水杨苷之外,还在杨树胶中发现了一个指纹特征性更明显的峰(A峰)是蜂胶中不存在的。通过ESI(±)/MS验证,证实水杨苷作为蜂胶与杨树胶鉴别指标的正确性。但是在HPLC-ESI(±)/MS中,A峰不能被检测到。因此,水杨苷和A峰可同时用于蜂胶与杨树胶HPLC指纹图谱的鉴别指标,但是A峰的具体结构还需进一步研究。