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【目的】肿瘤血管生成与其生长、侵袭和转移密切相关，抑制血管生成、促进肿瘤细胞凋亡是目前抗肿瘤治疗研究的热点。临床常用能够显著抑制肿瘤血管增生的药物有血管抑素（AS，Angiostatin）、内皮抑素（Endostatin）等，血管抑素重组蛋白现已经用于临床，但是由于生产费用高昂、治疗剂量大和需要长期给药治疗等不足，目前不能完全普及。临床研究表明，内皮抑素单独或联合应用具有低毒、低免疫原性和低耐药性的优点，但是有效性尚待考证。因此，寻找有效的联合应用血管生成抑制剂的肿瘤治疗方案是当今需要解决的难点问题。肿瘤坏死因子相关凋亡配体（TRAIL，Tumor necrosis factorrelated apoptosis ligand）是目前研究发现能明显促进肿瘤细胞凋亡的TNF家族成员。我们假设在肿瘤临床治疗中，如果有效的将抑制肿瘤血管生成、促进肿瘤细胞凋亡和肿瘤内照射的放射疗法相结合进行肿瘤靶向治疗，可能成为当今的一种新型肿瘤治疗方案。本研究通过构建PcDNA3.1-sTRAIL重组表达载体，对其进行扩增、纯化，采用放射性同位素131I标记血管抑素（AS）,在荷瘤裸鼠模型中进行PcDNA3.1-sTRAIL与131I-AS联合抑瘤实验。【方法】1．采用亲和层析法从人血浆中纯化得到纤溶酶原后用弹性蛋白酶进行有限消化得到血管抑素（AS）片段，采取Iodogen固相法将放射性核素131I标记于AS，并测定131I标记产物的标记率、比活度和体外稳定性。2．采取Trizol一步法提取总RNA，以提取液作为模板，下游引物引导进行RT反应得到cDNA。然后以cDNA为模板，PCR一步法试剂盒进行扩增反应，获得目的DNA片段并纯化，采用凝胶电泳观察目的片段sTRAIL的长度，将扩增DNA片段与载体PUCm-T连接，构建T-sTRAIL质粒。将T-sTRAIL质粒转入感受态细菌TGI，用含有Amp抗性的LB培养基筛选阳性克隆。碱裂解法抽提质粒T-sTRAIL，鉴定无误后将PcDNA3.1和鉴定正确的T-sTRAIL质粒分别用EcoRI和BamHI双酶切并分离纯化后，用T4连接酶连接，将连接载体转入感受态细菌TGI，Amp抗性的LB培养基筛选阳性克隆。提取质粒并进行酶切并外送鉴定，保存鉴定正确的质粒和菌种。最后将PcDNA3.1-sTRAIL转染293T细胞并利用Western blot进行目标蛋白鉴定。3．构建荷瘤裸鼠模型及SPECT显像培养A549细胞接种于裸鼠右前肢根部腹侧皮下，得到荷瘤裸鼠模型，尾静脉注射131I-AS0.2ml，3.7MBq，分别在2、12、24、48h进行SPECT显像。4．联合抑瘤作用观察将32只荷瘤裸鼠随机分为4组，每组8只，实验前3天给予含10%碘化钾饮水进行甲状腺封闭，瘤内注射131I-AS(含131I11.1MBq，AS12.5mg/kg)加入浓度约为1μg/μl的PcDNA3.1-sTRAIL50μl+Lipofectin50μl、131I-AS(含131I11.1MBq，AS12.5mg/kg)、PcDNA3.1-sTRAIL50μl+Lipofectin50μl（浓度为1μg/μl）和生理盐水0.3mL，1次/周，连续四周，动态观察28天内肿瘤体积的变化并计算抑瘤率，采用游标卡尺测量肿瘤大小，肿瘤体积计算公式：V=W2×L/2（W代表宽度，L代表长度），同时通过HE染色观察肿瘤组织的形态变化。【结果】1．L-LysineSepharose4B亲和层析法从人血浆中分离并纯化得到血管抑素（AS）。 Iodogen固相法得到的131I-AS标记率为78.2%87.7%、比活度为1.313.95TBq/g，将获得产物于-20℃存放7天观察其稳定性，131I-AS标记物放化纯度为原来的70.6%。结果显示Iodogen固相法所得标记物131I-AS比活度高、性质稳定。2．采用凝胶电泳观察目的片段sTRAIL的长度发现，与分子质量标记比较可见一条特异性条带大小为723bp左右，和预期大小相符，初步判定重组真核载体的构建成功。Westernblot鉴定结果得出蛋白与目的蛋白一致，大小为30.5kD，说明蛋白表达成功。3．SPECT显像发现肿瘤区域放射性浓度较其他区域高，说明肿瘤区域可以特异性摄取血管抑素。4．荷瘤小鼠模型在接受PcDNA-sTRAIL与131I-AS联合治疗期间肿瘤平均体积与其他各组相比增长缓慢，肿瘤增长抑制明显。131I-AS+TRAIL组抑瘤率结果较31I-AS组和TRAIL组分别提高了27%和45%。通过SPSS13.0统计学软件方差分析计算得到，在7、14、21、28天131I-AS+TRAIL治疗组、131I-AS组和TRAIL组移植瘤体积相对于生理盐水组均有非常显著差异（p＜0.01）。显微镜下观察移植瘤HE染色切片发现131I-AS＋TRAIL组较131I-AS组、TRAIL组和生理盐水组的肿瘤细胞坏死明显，并伴随不同程度炎细胞浸润。综合说明131I-AS和TRAIL联合治疗方案相比于单独的TRAIL和131I-AS治疗方案有更好的抑制肿瘤增长的作用。【结论】我们探讨了131I-AS联合PcDNA-sTRAIL治疗方法在荷瘤裸鼠中的抑瘤作用，本研究将抑制肿瘤血管生成、促肿瘤细胞凋亡和放射性核素的内照射三重作用相结合应用于抗肿瘤治疗，得到了显著抗肿瘤效果，将为核素内照射联合受体介导治疗手段在肿瘤治疗中提供新的有意义的实验证据与资料。