蛋白质抗体分子固—液界面吸附的QCM研究

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压电石英晶体微天平系统具有可实时检测、成本较低、操作简便、分析速度快、非标记性、高敏感度、高特异性以及良好的重现性等特点,已广泛应用于化学、医药、物理、生物、环境以及表面科学等领域。在本文的研究中,通过建立一种基于聚苯乙烯膜的压电石英晶体微天平检测系统,对研究抗体蛋白在聚苯乙烯表面的吸附行为进行研究和探讨。同时,在压电石英晶体表面采用五种不同的抗体固定方法使抗体固定在晶片表面,并对固定结果进行了分析和解释。本课题的主要研究内容和研究结果如下:1利用压电石英晶体微天平检测系统研究蛋白质抗体分子在聚苯乙烯表面的吸附行为:首先,在石英晶片正面涂上一层聚苯乙烯薄膜,注入抗-HBeAg溶液,通过石英晶体微天平可以实时监测到蛋白质抗体分子在聚苯乙烯膜表面的吸附进程。通过对抗-HBeAg蛋白分子在聚苯乙烯膜表面的吸附平衡时间和平衡浓度、吸附速率和吸附量的测定,结合相关数学模型和方程式,可以得到以下结论:抗-HBeAg蛋白分子在聚苯乙烯表面的吸附属于单分子层吸附,是一放热过程。其吸附等温线通过Langmuir模型可以得到较好的拟合效果。此吸附过程由液膜扩散和颗粒扩散联合控制。此外,用伪一级动力学模型和伪二级动力学模型对此吸附动力曲线进行拟合,都可以获得较好的拟合结果。2本文采用五种蛋白质抗体分子固定方法:直接吸附法、Polymer-coated法、硅烷法、SPA固定法以及APTES+SPA固定法,将蛋白质抗体固定于石英晶片表面,分析并解释抗体分子通过石英晶体微天平系统实时检测结果,对几种方法进行比较,得到如下结论:抗-HBeAg蛋白分子在聚苯乙烯界面的吸附频率变化量最小,原因在于抗体在聚苯乙烯表面的吸附主要依靠疏水作用力。利用APTES+SPA固定法,对蛋白质抗体分子的吸附量最大,可获得最佳检测效果,原因可能在于SPA分子Fc结合位点失效率较低。具备可用Fc位点的SPA分子可以同时与两个抗体结合,且不影响抗体分子活性。本课题的研究工作,为石英晶体微天平在生物传感器方面的检测研究应用打下基础,为从事免疫检测提供相应的理论和技术支持。
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