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目的:轻度高温影响雄性生殖能力是当今养猪生产实践中存在的重要隐患。热应激影响哺乳动物精子发生的分子机制尚不清楚。外源性细胞凋亡分子FasL/Fas信号与转化生长因子TGF-β1为细胞凋亡调节的主要分子,同时也是睾丸免疫豁免的候选分子,这些分子相互作用可能会使细胞凋亡增加、睾丸相对于病原的免疫抑制性升高。热应激是否通过调节FasL/Fas信号与TGF-β1表达进而导致睾丸免疫豁免,使生精能力降低、对病原的抵抗力降低,为此进行本项研究。方法:利用9头14月龄性成熟长白公猪随机建立3组热应激模型,每组3头,分别为对照组(Control)、环境热应激组(Environmental Heat Stress,EHS)、局部热应激组(Local Heat Stress,LHS)。对照组不作任何实验处理,室温(20-27℃)圈养在猪舍中,每日正常给水、喂食。环境热应激组每日将猪饲养在37-40℃猪舍中3 h,结束后赶回室温猪舍,连续处理7 d。局部热应激组的猪用自制的可控温加热垫覆盖在左侧睾丸阴囊表面(42℃加热1 h)。各组猪睾丸处理结束后迅速将猪睾丸组织摘取。一部分组织切成1 cm~3左右大小的小块置于Bouin氏液固定,用于石蜡组织切片的制作;剩余部分冻存于液氮,用于总RNA、总蛋白的提取。Fas、FasL、Caspase-8、TGF-β1通过qRT-PCR与Western blot检测mRNA与蛋白的相对表达量,通过免疫组织化学染色观察生殖细胞的定位。结果:1.FasL/Fas:环境热应激组猪睾丸中,FasmRNA与蛋白的相对表达量上调,免疫组化结果显示,Fas主要定位在各级生精细胞,细胞免疫阳性着色深于对照组。FasLmRNA与蛋白的相对表达量下调,免疫组化结果显示,FasL主要定位在支持细胞、精母细胞、精子细胞。局部热应激组猪睾丸中,Fas、FasLmRNA与蛋白的相对表达量均上调,细胞免疫阳性着色深于对照组,细胞定位未发生变化。2.Caspase-8:环境热应激组猪睾丸中,Casapse-8mRNA与蛋白的相对表达量上调,免疫组化结果显示主要定位在圆形精子细胞与精母细胞。局部热应激组猪睾丸中,Caspase-8mRNA与蛋白的相对表达量高于环境热应激组,细胞免疫阳性主要着色于圆形精子细胞与支持细胞。3.TGF-β1:环境热应激组猪睾丸中,TGF-β1mRNA与蛋白的相对表达量上调,免疫组化结果显示主要定位在支持细胞、精母细胞、长形精子细胞及间质细胞;局部热应激组猪睾丸中,TGF-β1mRNA与蛋白的相对表达量高于环境热应激组,免疫组化结果显示主要定位在圆形精子细胞、支持细胞与间质细胞。结论:轻度高温热应激影响猪睾丸精子发生。FasL/Fas信号与TGF-β1表达上调提示热应激猪睾丸生殖细胞的凋亡增加、睾丸免疫抑制性增强,为热应激条件下猪睾丸生精能力减弱、对病原易感性升高提供了一种新的分子机制的解释。