烟草黑胫病是桂西岩溶区烟草的主重病害,目前以化学防治为主,农药残留污染环境、危害人畜健康并使病原产生耐药性。生物防治具有无污染、无公害和长效性等优点,是今后烟草病害防治的主要方法。因此,本研究从广西岩溶区靖西县优质烟叶生产区分离烟草黑胫病病原及土壤细菌,通过拮抗试验、抗病能力测试等方法筛选拮抗菌株,对效果良好的株系再进行分类鉴定、抗病物质分析、小规模发酵和田间施用技术等研究,结果如下:1.从8份土壤样品中分离获得462株细菌,其中82株对烟草黑胫病菌有拮抗效果;复筛后得到拮抗效果较好的细菌16株;再依据抑菌圈大小、盆栽实验结果,获得拮抗效果良好的拮抗菌3株,编号为8-23、6-70和13。2.采用形态观察、生理生化测定、16S rDNA序列分析三种方法相结合,鉴定8-23、6-70和13三个菌株的种属关系。结果表明,菌株8-23为芽孢杆菌属(Bacillus spp.)枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的近缘种;菌株6-70可能为溶菌杆属(Lysobacter spp.)细菌;菌株13为假单胞杆菌属(Pseudomonas spp.)细菌。3.三个拮抗细菌的基本发酵工艺:(1)菌株8-23:种子菌龄12 h,接种量1%;在pH6.0马铃薯麦芽糖培养液、90/200 ml (培养基体积/三角瓶容积,以下相同)、30℃、180 rpm条件下培养24 h。(2)菌株6-70:种子菌龄12 h,接种量1%,在pH6.0马铃薯麦芽糖培养液、30/200 ml、30℃、180 rpm条件下培养24 h。(3)菌株13:种子菌龄12 h,接种量1%,在pH6.0马铃薯麦芽糖培养液、30/200 ml、30℃、240 rpm条件下培养24 h。4.三个拮抗细菌的抗病机制及其抗病物质特性:菌株8-23、6-70、13的抗病机制都是通过溶解细胞壁、使细胞质渗漏、破坏细胞结构和功能,从而达到抑菌抗病的目的。其抑菌物质的基本特性如下:(1)菌株8-23的抑菌成分大部分为耐高温蛋白质,对有机溶剂敏感,(NH4)2SO4盐析沉淀物有抑菌活性;(2)菌株6-70的抑菌成分部分为耐高温蛋白质,对有机溶剂敏感,(NH4)2SO4盐析沉淀物有抑菌活性;(3)菌株13的抑菌成分不耐高温,可能含有多种脂溶性成分和少量蛋白质,(NH4)2SO4盐析沉淀物有抑菌活性。