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研究目的：本课题将从临床观察持续性非卧床腹膜透析（CAPD）患者腹膜透析液内皮素-1（endothelin—1，ET—1）水平，并从细胞水平探讨局部内皮素系统在腹膜纤维化形成中的作用机制，通过体外实验应用非选择性内皮素受体拮抗剂（ETA／ETB受体拮抗剂PD142893）对腹膜间皮细胞进行干预，研究腹膜局部内皮素系统在腹膜纤维化形成中的作用，探讨腹膜纤维化的发生机制及治疗策略。 研究方法：1．在本院定期随访的CAPD患者中选取26例患者，放免法测定透析液及血浆中ET—1的表达，通过腹膜平衡试验（PET）确定患者腹膜转运类型，记录超滤量。通过Pearson相关分析，单因素方差分析和线性回归方程，分析血浆与腹透液ET-1的表达和意义。以人腹膜间皮细胞株（HMrSV5）为研究对象，采用放免法、免疫细胞化学检测不同时间、不同浓度的葡萄糖、甘露醇作用下人腹膜间皮细胞（peritoneal mesothelial cell，HPMC）分泌的ET-1水平。采用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测局部内皮素系统ET-1、内皮素受体（ETAR、ETBR）及内皮素转化酶（ECE）的基因表达。2．相差显微镜下观察HPMC细胞的形态改变，免疫细胞化学观察细胞角蛋白（CK）、波形蛋白的表达。氚标胸腺嘧啶核苷渗入法测定细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期。乳酸脱氢酶（LDH）测定细胞损伤。3．采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、放免法检测不同浓度的葡萄糖、ET-1作用下Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤连蛋白（Fn）及转化生长因子-β1（TGF-β1）、白介素-1β（IL-1β）蛋白水平，RT-PCR检测ColⅣ、Fn、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）基因表达，并在高糖和ET-1基础上加入非选择性内皮素受体拮抗剂（PD142893），观察上述指标的变化。免疫印迹法（Westernblot）检测p38MAPK、磷酸化p38MAPK（P-p38MAPK）蛋白水平。 研究结果：1．透析液中ET-1的实测值明显高于预测值（P＜0.05）。不同腹膜转运类型血浆、腹膜透析液ET-1的浓度、内皮素透析液血浆比值(D／PET-1)各组间均无显著差异（P＞0.05）。净超滤量与透析液ET-1的浓度呈负相关。正常HPMC分泌低水平的ET-1，高浓度的葡萄糖可诱导HPMC分泌ET-1增加，呈时间和剂量依赖。HPMC表达完整的ET-1、ETAR、ETBR、ECEmRNA。高糖作用下ET-1、ETAR、ETBRmRNA表达增强。2．ET-1作用下，HPMC出现梭形改变，CK8和波形蛋白仍为强阳性表达。ET-1促进HPMC细胞DNA合成，呈剂量依赖。ET-1增加HPMC的损伤。3．ET-1促进HPMC分泌ColⅣ、Fn及ColⅣ、Fn、MMP-2mRNA的表达。PD142893可下调高糖诱导的ColⅣ、Fn和MMP-2。ET-1刺激HPMC分泌TGF-β1、IL-1β，呈剂量依赖。高糖和ET-1可激活HPMC细胞的p38MAPK信号通路，而PD142893通过阻断ET—1的作用，部分抑制高糖激活的p38MAPK信号通路。 结论：1．腹腔ET—1可能部分来源于腹腔局部自分泌和旁分泌，腹膜超滤功能受损可能与腹腔ET-1水平有关。人腹膜间皮细胞存在内皮素系统，高浓度葡萄糖诱导其表达增加，HPMC可能是腹膜局部内皮素-1的来源之一。2．ET-1对HPMC有促收缩作用，促增殖作用，同时加重HPMC损伤。ET—1未使HPMC发生表型转化。3．ET-1有促HPMC细胞外基质形成作用。ET-1诱导的ECM的形成可能与致纤维化因子TGF-β1的途径有关。ET-1有促炎症作用，进一步促进ECM形成。ET-1的上述作用可能部分通过激活p38 MAPK信号通路。