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为了在我国建立特异、敏感、快速的CSFV诊断技术，为CSF的净化和控制提供有力的技术手段。本研究将荧光定量PCR（FQ-PCR）技术与ABI定量检测系统相结合，根据GenBank下载的29条猪瘟病毒（CSFV）全长序列、18条牛病毒性腹泻病病毒-Ⅰ（BVDV-Ⅰ）和6条BVDV-Ⅱ全序列进行综合比对，为保证CSFV荧光探针的特异性，避开与BVDV同源部分，设计了5组CSFV的特异性探针和引物；采用SM、HCLV细胞毒和GDZ1／95、HeBHH1／95、BJCY1／96、JL1／94阳性CSF血毒样品筛选了最佳探针和引物，优化了反转录酶用量、上下游引物浓度和探针浓度等反应试剂，建立了FQ-PCR检测CSFV的试验体系；通过体外转录制备了介于5’-UTR与Npro之间的非感染性RNA标准品，经核酸蛋白紫外分析仪测定RNA纯度较高(OD260／OD280=1.9345)，建立的CT值与模板起始浓度对数之间的线性关系良好，相关系数为r=0.999，斜率为-3.412，并将系列稀释的CSFV RNA标准品经重复测定证实批内和批间重复性均较好，变异系数分别为0.66-4.42％和0.77-4.19％；在其它病原体的特异性试验中，其它病原的检出率均为零，说明该方法具有很强的CSFV特异性；在敏感度符合试验方面，与CSF免疫荧光试验（HCFA）符合率为88％，且比HCFA方法更敏感，较RT-nPCR方法敏感100倍；分别采用分三次合成、经相应检验合格的引物和探针及其他试剂按优化后反应体系的要求配制成三批CSFV FQ-PCR试剂，编号为20051001、20051002、20051003，进行可重复性试验和为期10个月的稳定性试验，综合评价了CSFV FQ-PCR检测方法的多项指标，并进行了试剂盒组装，成功研制了特异、灵敏、快速的CSFVFQ-PCR实验室诊断试剂盒。本试剂盒与进口试剂Ready-To-Go RT-PCR Beads和常规RT-nPCR相比，从反应时间、CT值表现、荧光增幅和试验成本等多方面都体现了FQ-PCR检测CSFV的优越性。 采用研制的CSFV FQ-PCR试剂盒与HCFA或病毒分离检测方法对我国19个省市自治区的61个采样点187份可疑CSF组织病料进行临床应用符合试验，统计结果显示CSFV FQ-PCR技术对所有组织病料的阳性检出率为50.80％，HCFA的阳性率为41.27％，差异极显著（t=3.643，p＜0.01），且FQ-PCR与HCFA间的符合率为86.24％。将CSFV FQ-PCR检出为阳性，同时HCFA为阴性的样品，采用RT-nPCR E2基因全长扩增产物测序验证，证实了实时CSFV FQ-PCR试剂盒对于田间样品CSF病原的诊断具有快速、准确和敏感的特性。 为了对HCLV生产进行全程量化质量监控，将CSFV FQ-PCR技术应用于HCLV疫苗细胞培养液半成品的效力检验，分别对3个批次，总共13次收的疫苗原液和5、10、15、20、25万倍稀释液，同时用兔体定型热反应和FQ-PCR进行检测，比较并确立两种实验结果间的相关性，即两只兔子均为定型热反应的CT值范围为26.63-28.80；一只有一只无定型热反应的CT值范围为28.29-30.72；两只兔子均无定型热反应的CT值范围为30.3-32.79。分析并证实了不同的兔体定型热反应与相应的CT值范围、病毒含量之间都存在着较好的相关性。CSFV FQ-PCR技术应用于HCLV疫苗半成品质量监控，将更准确地指导疫苗的生产。