论文部分内容阅读
目的:1.探讨粉防己碱(tetrandrine,TET)对人膀胱癌耐药株BIU-87/ADM多药耐药性(multidrug resisitance,MDR)的逆转作用及其机制。2.证实粉防己碱能逆转人膀胱癌耐药株BIU-87/ADM的凋亡抗性,并初步探讨其可能的机制。方法:1.应用CCK法筛选出对BIU-87和BIU-87/ADM细胞无明显细胞毒作用的粉防己碱浓度;CCK法检测粉防己碱逆转多药耐药的活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光法分别检测粉防己碱对MDR1mRNA和P-gp蛋白表达的影响;TUNEL法分析粉防己碱对BIU-87和BIU-87/ADM细胞凋亡的影响。2. Annexin-V与PI双染法流式细胞术分析粉防己碱对BIU-87和BIU-87/ADM细胞凋亡的影响。免疫细胞化学法和RT-PCR法检测粉防己碱对BIU-87/ADM细胞内survivin、livin、caspase-3表达水平的影响。结果:1. 1.0μg/mL粉防己碱对BIU-87和BIU-87/ADM细胞均无明显细胞毒作用(抑制率均在10%以下);1.0μg/mL粉防己碱显著增加阿霉素(adriamycin,ADM)对耐药株BIU-87/ADM的细胞毒性作用(P<0.01),逆转指数(reversal fold,RF)为5.33,而对敏感株BIU-87无明显作用(P>0.05),RF仅为1.33;1.0μg/mL粉防己碱能明显抑制MDR1mRNA和P-gp蛋白在BIU-87/ADM的表达;1.0μg/mL粉防己碱能明显增强阿霉素诱导BIU-87/ADM细胞的凋亡(P<0.01),而对BIU-87细胞影响不大(P>0.05)。2.在1.5μg/mL阿霉素作用下BIU-87细胞和BIU-87/ADM细胞的凋亡率分别为(57.79±4.73)%和(12.42±3.24)%,说明了BIU-87/ADM细胞产生了凋亡抗性。1.0μg/mL粉防己碱和1.5μg/mL阿霉素共同作用48h,能使BIU-87/ADM细胞凋亡率增加至(40.86±4.35)%,与单独应用阿霉素相比差异有统计学意义(P<0.01)。而对BIU-87细胞的凋亡率无明显作用(P>0.05),这说明了粉防己碱能逆转BIU-87/ADM细胞的凋亡抗性;1.0μg/mL粉防己碱和1.5μg/mL阿霉素能使BIU-87/ADM细胞株中survivin、livin的表达水平显著降低,caspase-3的表达水平明显升高,与单用阿霉素比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:1.低浓度的粉防己碱能逆转BIU-87/ADM细胞的多药耐药性,这一作用可能与粉防己碱抑制P-gp的表达和诱导化疗药物促进膀胱癌细胞凋亡有关。2.低浓度的粉防己碱能逆转BIU-87/ADM细胞的凋亡抗性,这一作用可能与粉防己碱和阿霉素联用后下调survivin、livin的表达和上调caspase-3的表达有关。