目的:创建小鼠角膜创伤修复的动物模型;研究小鼠角膜创伤修复过程中基因表达谱的变迁;观察细胞增殖和纤维化调节因子在创伤修复早期的动态变化。 方法: 1.创建动物模型 以三种创伤方式制作小鼠角膜穿通伤动物模型,临床评分确定重复性高,再现性好的动物模型。行HE染色和免疫组化评价角膜创伤修复的过程。 2.应用基因表达芯片研究小鼠角膜创伤修复过程中基因表达谱的变迁 收集伤后3d和14d的小鼠角膜,分别与正常角膜进行芯片杂交。读取数据后,分析差异表达基因的表达谱和特点。 3.观察细胞增殖和纤维化调节因子在小鼠角膜创伤修复早期的动态变化 收集正常时及伤后6h,24h,72h的小鼠角膜,行RT-PCR,观察TGF-β2、CTGF、G0/G1开关基因2的变化,该实验同时是对基因芯片数据的验证。 结果: 1.三种创伤方式中三棱针角膜中央穿刺是重复性和再现性最好。 2.角膜创伤后3d和15d差异性表达基因共297个,以下调基因为主。细胞骨架/细胞外基质是主要的差异性表达基因类别之一,肌球蛋白、丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制剂、视黄醇结合蛋白4等基因下调10倍以上。 3.TGF-β2、CTGF、G0/G1开关基因2在伤后24h一过性增高,之后下调。 结论: 1.三棱针角膜中央穿刺法可成功制作角膜创伤修复的动物模型。 2.基因芯片实验结果提示,小鼠角膜创伤修复调控因子的研究方向是大量未知功能或未被涉及的基因。 3.TGF-β2、CTGF的干预时机应在伤后24h内。 4.基因芯片应用于研究小鼠角膜创伤修复的分子机制,高效可靠。