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酪氨酸酶（EC1.14.18.1）是一种含铜离子的金属酶，在色素合成方面具有重要的生理功能。广泛存在于微生物、动植物及人体中。酪氨酸酶的抑制剂在医药、美容以及农业具有潜在的应用价值。本课题选择天麻素作为研究对象，通过酶抑制动力学研究了天麻素对酪氨酸酶的抑制作用，通过分子动力学模拟出天麻素和酪氨酸酶的相互作用位点。以及天麻素对鼠黑色素表皮细胞（HEM）的形态、细胞增殖率、细胞凋亡率、酪氨酸酶活性及黑色素生成量的影响。结合体外细胞学观察，研究天麻素对氧化损伤细胞的保护作用。研究内容与结果如下：1.采用分光光度计法建立酪氨酸酶抑制剂反应体系。确定在室温（25oC）下，以2mM的左旋多巴为底物，酶的最终浓度是6.65μg/ml反应体系。结果表明：天麻素对酪氨酸酶活性的抑制存在剂量依赖性，当抑制率达到50%时，天麻素的半抑制浓度(IC50)为69.37±9.22mM；天麻素对酪氨酸酶的抑制作用表现为混合型抑制，抑制常数Ki=123.8±20.2mM。2.同源模拟法模拟酪氨酸酶三维空间结构。使用AutoDock Vina程序预测了天麻素和酪氨酸酶之间有17个对接集群，计算出天麻素和酪氨酸酶的结合能。预测了天麻素与酪氨酸酶的对接位点，并检测结构的稳定性。结果表明：天麻素和酪氨酸酶的结合能为-6.3千卡/摩尔；天麻素直接作用于酪氨酸酶活性位点，通过自身羟基抑制酪氨酸酶活性。3.倒置显微镜观察天麻素对HEM细胞形态的影响；MTT比色法和PI染色测定天麻素对HEM细胞增值率和凋亡率的影响；L-多巴氧化法测定天麻素对HEM细胞酪氨酸酶活力的影响；氢氧化钠裂解法测定天麻素对HEM细胞黑色素生成量的影响。结果表明：天麻素对HEM细胞酪氨酸酶有抑制作用，且呈浓度性依赖；药物作用72h后细胞黑色素生成显著减少；同时天麻素对细胞毒性很小，在0-32mM浓度范围内，天麻素对细胞形态、增值率、凋亡率基本无影响。4.光镜实验比较各组细胞形态学的变化；台盼蓝拒染法检测细胞存活率；MTT实验比较各组细胞增殖活力的改变； PI染色测定细胞凋亡率，酶生化法测定胞浆内丙二醛（MDA）含量和总抗氧化能力（T-AOC）。结果表明：500mmol/L的H2O2处理下，天麻素在250-750μg/ml浓度范围内可以提高HEM细胞的活性，降低了细胞凋亡率，胞浆中MDA含量下降，T-AOC含量提高；因此，天麻素在低浓度范围内对氧化损伤的细胞具有一定保护作用。