【摘 要】
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目的:本课题在前期小鼠体内实验的基础上,建立由LPS诱导的IEC-6细胞上皮屏障损伤模型,进一步研究薏苡附子败酱散(YFBS)对模型细胞的保护作用及机制。方法:以MTT法分别检测YFB
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目的:本课题在前期小鼠体内实验的基础上,建立由LPS诱导的IEC-6细胞上皮屏障损伤模型,进一步研究薏苡附子败酱散(YFBS)对模型细胞的保护作用及机制。方法:以MTT法分别检测YFBS和LPS在一定浓度梯度内对正常IEC-6细胞活性的影响;以MTT和ELISA法分别检测LPS损伤下细胞活率和炎症因子TNF-α、IL-6的分泌量,确定中药最佳实验浓度和LPS最佳造模浓度。设空白组、模型组,YFBS全方组、去附子组和单用附子组进行造模和中药干预,并进行以下检测:(1)MTT和ELISA分别检测各组细胞活率和细胞因子分泌量;(2)跨膜电阻仪测量各组细胞跨膜电阻值;(3)Western-Blot和免疫荧光分别检测各组细胞紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达和分布情况;(4)按照试剂盒说明检测各组细胞上清SOD、MDA分泌量;(5)Western-Blot和RT-PCR分别检测各组细胞抗氧化应激通路Nrf2/HO-1上下游两个蛋白表达量及Nrf2 m RNA的表达量。结果:(1)0.5、1、5、10、20mg/m L YFBS对IEC-6细胞活性无明显影响(P>0.05);10μg/m L LPS对IEC-6细胞活性抑制明显(P<0.01)且炎症因子TNF-α、IL-6分泌增加(P<0.01);与模型组比较,10mg/m L YFBS对细胞活性升高最明显(P<0.01),炎症因子分泌明显减少(P<0.01)(2)与模型组比较,YFBS全方、YFBS去附子和单用附子三组细胞活性明显提高(P<0.05);全方组可降低炎症因子分泌量(P<0.01),单用附子组无明显作用(P>0.05);(3)与模型组比较,YFBS全方、YFBS去附子和单用附子三组均可提高细胞跨膜电阻值(P<0.01),全方组最高(P<0.01),其余两组相比无明显差异(P>0.05);三组可明显升高细胞ZO-1的表达(P<0.01);全方和去附子组能升高Occludin的表达(P<0.01),单用附子无明显作用(P<0.05)。免疫荧光显示,模型组ZO-1、Occludin亮度降低,分布稀疏、模糊,YFBS全方及YFBS去附子干预后,蛋白表达增加,分布情况好转;(4)YFBS全方、YFBS去附子和单用附子均可升高LPS作用下细胞SOD表达量(P<0.01),降低MDA表达量(P<0.01);(5)Western-Blot和RT-PCR结果显示:YFBS全方、YFBS去附子和单用附子均可降低过度表达的Nrf2、HO-1蛋白及Nrf2 m RNA,单用附子尤为显著(P<0.01)。结论:(1)薏苡附子败酱散能够提高LPS诱导的IEC-6细胞活性,降低炎症因子TNF-α、IL-6的分泌,增加紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达,对上皮屏障损伤具有修复作用。(2)薏苡附子败酱散能对抗LPS诱导的氧化应激损伤,抑制过度激活的Nrf2/HO-1通路。(3)三组中药对上皮屏障损伤的保护作用大小依次为全方组>去附子组>单用附子组,但附子与其余两味药相配可起到协同增效作用。
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