癫痫是一种常见的神志性疾病,其病变常涉及多个脏腑。在脏腑之中,由于脾胃位居中焦,能够转枢五脏气机,影响神志,同时,脾胃运化失常化生痰浊,亦是神志病的常见原因,因此认为脾胃是主持精神神志活动的重要脏器,主张以调理脾胃为主来治疗精神神志疾患,并选用草果知母汤加减来治疗癫痫这一神志性疾病。经既往的临床验证及大量的动物实验研究,已经证实:①本方对多种类型的癫痫发作及多种类型的癫痫动物模型均有明显的拮抗作用;②本方抗癫痫过程中,可使脑内氨基酸类神经递质及受体、神经肽类等发生含量、活性与基因表达的变化,其中以 Glu 及其 NMDA 受体的变化最为显著,其降低 NMDA 受体的含量与降低 NMDAR1 mRNA 的表达具有同步性,具有与非竞争性 NMDA 受体阻断剂 MK-801相似的阻断点燃模型形成的作用,但不具备 MK-801 的毒副作用,提示本方具有成为作用于 NMDA 受体系统抗癫痫药的前景。但由于本方药味过多,使其研制难以步入较高层次,因此,本课题对本方首次进行拆方研究,以期揭示此方的最佳配伍方法,发现全方的核心所在。理论部分: 首先将<<内经>>中有关癫痫的记载进行整理研究,分析和探讨了<<内经>>对癫痫病因病机的认识,对癫痫的防治及其理论对后世的影响。 其次就历代医家对癫痫的有关认识进行了初步探讨。包括癫痫的分类、病因病机,以及从脏腑论治癫痫的方法,分析了心、肝、肾、脾四脏功能活动与癫痫发作的关系,并简单地提出治法方药,以供临床参考。实验部分: 使用 PTZ 点燃大鼠模型,采用行为学方法,对草果知母汤加减拆方组进行筛选,选取抗痫效优组。随后,利用氨基酸自动分析仪、放射免疫、免疫组织化学、分子原位杂交等技术,从动物脑内氨基酸类及神经肽类神经递质或调质含量的变化,GABAAR mRNA、NMDAR1 mRNA 和 GABA 受体蛋白表达等不同层次,对草果知母汤加减及其效优拆方组抗痫作用机理进行了探讨。 实验结果显示: 1.草果知母汤加减能降低点燃大鼠癫痫发作级别,效果非常显著(P<0.001),有明显的抗痫作用。拆方各组中,调理脾胃气机组(拆方 1 组)、清肝敛肝合清心开窍组(拆方 2 组)能明显降低大鼠癫痫发作级别(均为P<0.01);调理脾胃加清肝热组(拆方 3 组)能降低癫痫发作级别,但效果不显著(P>0.05);而清肝敛肝组(拆方 4 组)作用效果不明显(P>0.05),反而使癫痫发作级别升高。 实验中,单纯调理脾胃气机法及清肝敛肝合清心开窍法抗癫痫有效,证实了调理脾胃法治疗癫痫的可行性,以及传统从心肝入手治疗癫痫的合理性,然而在治疗癫痫各组方药中,以全方效果最佳,证实全方配伍的科学性及合理性。<WP=5>IV 草果知母汤加减抗癫痫作用的拆方研究 2.筛选出两个效优拆方组(拆方1组和拆方2组),与全方组一起进行抗癫痫作用机理比较研究。 主要结果如下: (1)草果知母汤加减能降低 PTZ点燃大鼠海马内GABA、Glu、SS含量;使海马及皮层内GABAAR mRNA 和 GABA 受体表达均明显增强;使海马及皮层内NMDAR1 mRNA 表达显著减弱。 (2)拆方 1 组能明显降低点燃大鼠海马内 GABA 含量,而对 Glu、SS 含量变化影响不明显;能显著上调点燃大鼠海马内 GABAA受体基因及 GABA 受体的表达,而在皮层部位,虽能增强 GABAAR mRNA 的表达,但对 GABA 受体的表达影响不大;能使大鼠海马、皮层内 NMDAR1 mRNA 表达明显下降。 (3)拆方 2 组能降低 PTZ点燃大鼠海马内GABA、Glu、SS含量;能显著上调点燃大鼠海马和皮层内 GABAA受体基因及 GABA 受体的表达;能明显减弱点燃大鼠皮层NMDAR1 mRNA 表达,但对海马内 NMDAR1 mRNA 表达的影响不大。 主要结论如下: (1)草果知母汤加减的抗痫作用机理可能是①上调脑内 GABAAR mRNA 和 GABA受体表达水平,从而发挥其抑制性神经递质作用,抑制癫痫发作;②降低脑内NMDAR1 mRNA 表达水平,减少 Glu释放,使其不能发挥兴奋性神经递质作用,故能抑制癫痫发作;③能使脑内 SS 释放减少,减弱它对 GABA 的抑制作用以及对 Glu 的兴奋作用,起到制痫作用。 (2)拆方 1 的抗痫作用机理可能是①通过增强脑内 GABA 受体基因的表达,使GABA 受体含量增多,从而抑制癫痫发作;②通过减弱点燃大鼠脑内 NMDA 受体基因的表达,从而发挥抗痫作用。 (3)拆方 2 抗痫作用机理可能是①通过增强脑内 GABA 受体基因的表达,使GABA 受体含量增多,从而抑制癫痫发作;②降低脑内 NMDAR1 mRNA 表达水平,使脑内 Glu 释放减少,从而发挥抗痫作用;③能使脑内 SS 释放减少,减弱它对 GABA的抑制作用以及对 Glu 的兴奋作用,起到制痫作用。 实验结果提示:在抗癫痫过程中,草果知母汤加减方中起主要作用的拆方组是拆方 1 组(草果、知母、半夏、厚朴)和拆方 2 组(白芍、黄芩、石菖蒲)。然而两个拆方组的抗痫作用机理并不完全同于全方组,主要存在着作用部位以及途径的不同。另外,乌梅、甘草在全方中的地位,以及拆方 1 组和拆方 2 组结合与全方进行抗痫作用比较,尚需进一步研究。