紫杉醇联合DC疫苗对小鼠宫颈癌移植瘤影响的实验研究

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cpu1987
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目的:采用紫杉醇和DC疫苗联合作用于小鼠宫颈癌移植瘤,观察小鼠肿瘤组织微环境里面的IL-6这一免疫抑制因子与肿瘤微环境的细胞因子VEGF发生的变化,对应用紫杉醇化疗药物后能否增强DC疫苗抗肿瘤效应进行了研究和探讨。   方法:   1、建立荷瘤小鼠模型:取宫颈癌U14细胞,在其处于对数生长期时,通过计数板计数,将浓度调整至1×106个/0.2ml,将0.2毫升细胞接种到C57BL/6小鼠身体的背部或者腹部皮下,完成接种以后的第七天展开实验。   2、制作DC疫苗:取宫颈癌U14细胞,通过照射γ射线将它们灭活,而后予以反复的冻融,从而获得肿瘤细胞抗原。颈椎脱位法处死未荷瘤小鼠,无菌环境下提取小鼠身上股骨,获得骨髓细胞,在rmIL-4以及rmGM-CSF诱导下进行培养,这样就能够获得小鼠骨髓来源的树突状细胞,再将树突状细胞与肿瘤抗原共同培养,获得DC疫苗,流式细胞仪鉴定DC表型。   3、实验描述:对荷瘤小鼠予以随机分组,一共划分成4组,一组由10只组成:对照组有10只,将0.2ml的生理盐水腹腔内注射,每天注射一次,每只要注射0.2ml,持续14天;DC疫苗组10只,将DC疫苗于荷瘤小鼠的肿瘤局部注射一次,一周后重复注射一次;紫杉醇组10只,每只腹腔内注射紫杉醇0.2ml,持续注射14天,每天注射一次;DC疫苗和紫杉醇联合组10只,将紫杉醇0.2 ml于荷瘤小鼠腹腔注射,一日一次,连用3天,将DC疫苗于肿瘤局部注射一次,一周后重复。称量瘤重,计算抑瘤率。   4、免疫组化SP法:用麦克奥迪医学图像分析软件对组化结果行定量分析,用平均光密度值(OD值)检测小鼠瘤组织中VEGF、IL-6的表达情况。   5、分析相关的数据:采用多样本均数比较的方差分析及两两比较的S-N-K检验,数据分析采用SPSS13.0统计软件完成,以P<0.05为差异有统计学意义。   结论:   1、鉴定DC:在倒置显微镜下观察,于培养的第七天发现细胞出现树突状突起,大部分呈悬浮状生长,通过流式细胞仪作出鉴定,CD11c+CD86+DCs纯度为89%,说明为典型成熟的DCs。   2、每组小鼠具体的生长状态:各组小鼠于接种U14瘤细胞后1~10天,其生长状态均良好,第15天后,对照组体重慢慢下降,活动、进食逐渐减少;紫杉醇组,用药一周后,进食减少;用药二周后,出现精神萎靡,而且活动缓慢。联合组与DC疫苗组:精神状态较好,体重无明显下降趋势。   3、紫杉醇与DC疫苗对小鼠移植瘤的影响:在完成接种瘤细胞以后的一到十天里,各组小鼠移植瘤生长大致相同;在十一到十五天,对照组生长最快;联合组生长最慢;在十六到二十四天,对照组的生长速度明显快于其他三组,而无论是紫杉醇组,还是联合组,移植瘤都呈现缩小的趋势。从第十八天起,DC疫苗组呈现缩小的趋势,而缩小的速度最快的、表现的最明显的就是联合组。经过称重,联合组、紫杉醇组、对照组以及DC疫苗组对应的重量依次是(1.728±0.005)克,(1.969±0.006)克,(3.159±0.005)克以及(2.794±0.006)克,和对照组进行比较,用药组的具体重量都要低一些,P低于0.05;各用药组组间两两比较瘤重差异均有统计学意义,也就是说P低于0.05;依据具体的计算公式,对于联合组和DC疫苗组以及紫衫醇组对应的抑瘤率进行计算,对应的结果分别是45.29%,11.55%以及37.67%,可以看出,在抑瘤率上,最高的是联合组,最低的是DC疫苗组,三组组间两两比较抑瘤率差异均有统计学意义,也就是说P低于0.05。   4、免疫组化结果:对照组、DC疫苗组、紫杉醇组、联合组中VEGF的OD值分别为(0.468±0.003)、(0.466±0.003)、(0.141±0.004)、(0.138±0.003);IL-6的OD值分别为(0.472±0.006)、(0.473±0.004)、(0.139±0.004)、(0.135±0.005):紫杉醇组和联合组VEGF、IL-6的表达量分别与对照组、DC疫苗组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);而紫杉醇组与联合组相比、DC疫苗组与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。   结论:   1、通过本实验观察到,将U14细胞培养数量达1×106及以上时,注射至C57BL/6小鼠可生成肿瘤,少于此量时很难或不形成肿瘤。   2、紫杉醇作用于荷瘤小鼠,可以下调肿瘤微环境中的细胞因子VEGF和免疫抑制因子IL-6的表达,减轻肿瘤微环境中的免疫抑制。   3、先用紫杉醇作用于荷瘤小鼠,再于肿瘤局部注射DC疫苗,能够减少肿瘤微环境中免疫抑制因子IL-6,细胞因子VEGF的表达,进而增强宿主对DC疫苗的敏感性,增强宿主主动性抗肿瘤免疫。
其他文献
目的:本研究通过盆腔超声观察正常女童子宫卵巢的发育情况,探求不同年龄、不同Tanner分期的健康女童子宫、卵巢大小和形态的正常参考范围。   方法:研究对象是227例健康的