第一部分初步探索IB4~+神经元轴突再生能力与PTEN基因表达的相关性目的:神经损伤是临床一大难题,损伤后功能恢复欠佳,致残率高。在外周神经中,能被植物凝集素(Isolectin B4,IB4)标记的神经元,其轴突再生能力尤其薄弱,研究发现抑癌基因PTEN在神经系统中广泛表达,抑制PTEN基因能够促进中枢神经系统的轴突再生。因此,我们拟通过检测PTEN基因在IB4~+神经元中的表达量以及其在坐骨神经损伤后表达量的变化,探寻PTEN基因与IB4~+神经元轴突再生能力的相关性。方法:在本研究中,我们利用普通小鼠以及行坐骨神经损伤模型(Axotomy)小鼠的背根神经节(DRG)进行神经元培养,测定比较IB4阳性(IB4~+)与IB4阴性(IB4~-)神经元轴突再生的长度;取DRG组织冰冻切片后进行免疫荧光染色,比较PTEN基因在IB4~+与IB4~-神经元内的分布情况以及小鼠在坐骨神经损伤诱导后PTEN基因在IB4~+神经元中表达量的变化。结果:无论是普通小鼠还是Axotomy小鼠神经元培养后,IB4~+神经元轴突再生长度均明显短于IB4~-神经元,两者有统计学差异(p<0.05);DRG组织切片染色结果显示,IB4~+神经元中PTEN的表达量明显高于IB4~-神经元,且在损伤诱导后IB4~+神经元中PTEN的表达量没有明显下降。结论:IB4~+神经元的轴突再生能力明显弱于IB4~-神经元,PTEN基因在IB4~+神经元中的表达量明显高于IB4~-神经元,且此表达量在损伤诱导后无明显下降。第二部分抑制PTEN基因促进IB4~+神经元轴突再生目的:外周神经损伤后神经元轴突再生困难,其中IB4~+神经元的再生能力尤其薄弱。有研究表明,抑制PTEN基因能促进中枢神经再生,我们第一部分的研究也显示:PTEN基因参与了IB4~+神经元的轴突再生能力的调控且在其中起到关键作用。因此,我们的第二部分研究旨在检测抑制PTEN基因,是否能够促进IB4~+神经元轴突再生。方法:体外实验中取普通小鼠以及Axotomy小鼠DRG,并分别加入两种PTEN抑制剂进行培养,测定IB4~+神经元轴突长度。体内实验中取选择性敲除PTENflox/flox转基因小鼠通过注射AAV-Cre病毒敲除PTEN基因,取其DRG进行神经元培养,测定IB4~+神经元轴突长度。结果:体外实验,无论在普通小鼠还是Axotomy小鼠培养的DRG神经元中,PTEN抑制剂均能明显抑制PTEN基因的表达,且PTEN受到抑制后,IB4~+神经元轴突再生的长度均较对照组有明显增高,两者有统计学差异(p<0.05);体内实验,敲除PTEN基因的小鼠DRG在神经元培养后,IB4~+神经元轴突再生长度较对照组明显增高,两者有统计学差异(p<0.05)。结论:抑制PTEN基因表达,能够导致IB4~+神经元的轴突再生能力明显增强。