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目的:通过制取富自体浓缩生长因子纤维蛋白(concentrated growth factors,CGF)提取液,观察其对MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化的影响,为临床应用CGF提供相应的实验依据。方法:(1)将收集于志愿者的血液通过Medifuge离心加速机制备CGF,再采用冷冻联合37℃孵育的方法制取CGF提取液。(2)实验组采用浓度分别为5%、10%、20%的CGF条件培养基(含10%FBS,1%双抗),对照组采用α-MEM完全培养基(含10%FBS,1%双抗)培养MC3T3-E1成骨细胞,培养1、3、5、7天后CCK-8法检测细胞增殖情况,确定CGF提取液的最佳使用浓度,应用于后续实验。(3)实验组使用CGF条件培养基,对照组使用α-MEM完全培养基,分别在第1、3、5、7天时,进行碱性磷酸酶(ALP)活性检测;在第3、7天时,实时荧光定量PCR(RT-PCR或qPCR)测定MC3T3-E1成骨细胞中Runt相关转录因子-2(Runt-related transcription factor-2,Runx2)和成骨细胞特异性转录因子(Osterix,Osx)基因的表达情况。结果:(1)按照CGF标准化制备程序,能成功将血液分成明显的三层结构,形成体积较大、柔软、韧性强的CGF凝胶。(2)在分别培养1、3、5、7天,CCK-8法测得各浓度的CGF条件培养基的吸光度值(OD)均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);比较三种浓度CGF条件培养基的效果,10%CGF组在各个时间点促细胞增殖的作用均强于5%CGF、20%CGF组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)ALP检测结果发现,实验组和对照组的吸光度值均随着时间延长而逐渐增加(P<0.05),在第1天时两组吸光度值差异无统计学意义(P>0.05),但分别在第3、5、7天时,实验组的吸光度值均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组MC3T3-E1成骨细胞中Runx2和Osx的基因表达量都随着实验时间的延长逐渐增加(P<0.05),且在各个时间点,实验组Runx2和Osx的基因表达水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)CGF提取液可促进MC3T3-E1成骨细胞增殖,但浓度为10%的CGF提取液促进细胞增殖的效果最明显。(2)CGF提取液中的生长因子能够增加MC3T3-E1成骨细胞的碱性磷酸酶活性,促进细胞分化成熟。(3)CGF提取液中的生长因子能有效地提高MC3T3-E1成骨细胞中成骨相关基因的表达水平。