抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体制备及其检测方法的建立

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小麦赤霉病菌产生的毒素不仅在病害发展过程中具有加重赤霉病的作用,而且污染谷物导致严重的食用安全性问题。脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是其产生的最重要的一种毒素,由于DON的危害严重,引起了各国的普遍重视,建立快速、灵敏、有效的毒素检测方法显得十分迫切。真菌毒素的检测传统上一直是以色谱化学技术为依托,但免疫检测方法具有检测快速、费用低廉、易于操作、简单易携、且高灵敏度等特点,近年来日益受到国内外广泛的关注。本试验旨在制备可用于检测被脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染的粮谷类特异性单克隆抗体。本试验首先将脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的衍生物3-半琥珀酰-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-HS-DON)与卵清蛋白(OVA)采用碳化二亚胺法进行偶联得到人工抗原,以此人工抗原免疫BAL B/C小鼠,取该鼠脾细胞与SP 2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆,得到了1株能稳定分泌DON抗体的单克隆细胞株(3B2),并制备单克隆抗体腹水。经检测3B2的抗体类型及亚类均为IgG1,其轻链为κ链.腹水通过间接酶联免疫吸附测定效价在1×107以上。该单克隆抗体与脱氧雪腐镰刀菌烯醇特异性结合反应的50%抑制质量浓度为29μg/L,除与3-acetyldeoxynivalenol(3-Ac-DON)的交叉反应率为78.38%,与其他脱氧雪腐镰刀菌烯醇结构类似物无交叉反应,具有较高的灵敏度和特异性,有较好的应用价值。本研究成功制备的高亲合力和高特异性的抗DON单克隆抗体,为建立谷物和农产品中DON的快速免疫检测技术奠定了基础。选取杂交瘤细胞株3B2所分泌的抗体进行研究,建立了ELISA检测体系,其检测条件为:样品提取液甲醇的浓度为8%,包被抗原3-HS-DON-BSA浓度2μg/mL,腹水稀释至1×10-7,2%卵清蛋白(OVA)作为封闭物;OD450吸光值作纵坐标与DON浓度(μg/mL)的对数值作横坐标建立检测曲线,在0.01μg/mL-10μg/mL范围内呈显著线性关系,检测方程为y=0.2396x+0.3177,相关系数达0.9999,检测极限值为11μg/L。批内和批间变异系数分别为1.2%和4.7%,标样的添加回收率分别为90.73%、89.30%、86.80%和80.12%。
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摘 要:文章针对防城港九龙寨海堤所在区域的地理特点,根据水土流失特点预测防治目标,提出防治方案并分析其生态效益。  关键词:水土流失;防治措施;生态效益  1 概述  1.1 项目概况  九龙寨海堤工程位于防城港市港口区企沙镇东面,濒临北部湾。工程按10年一遇防潮标准,工程级别为5级。工程新建海堤堤线总长3114m,涝涵管14个,纳潮闸2个,码头1座,扩建防汛抢险道路1km。工程由主体工程区、施工