本研究针对二维液相在复杂样品分离中的不足,结合新的混合模式色谱,构建基于Sephadex LH-20 × RPLC联用的新型二维色谱方法体系,并探索该系统在中药材分析和分离制备上的应用。构建Sephadex LH-20与反相色谱联用的在线分析系统,以含多个化合物的模式混合物作为研究对象,通过探究各化合物的液相保留行为证明了葡聚糖凝胶在甲醇/水洗脱模式下可兼具尺寸排阻、氢键吸附、分配三种分离机制。以红花作为研究对象,在确定溶剂洗脱模式的基础上考察第一维Sephadex LH-20柱的柱长、流速等因素对分离效果的影响,确定分离参数;选择适合该二维系统的接口;将构建的Sephadex LH-20 × RPLC联用模式与RPLC × RPLC联用模式和HILIC × RPLC联用模式进行分离效果的比较,Sephadex LH-20 × RPLC联用模式显示出了远优于其他两个联用模式的正交性分离度(72.9%),同时强大的样品承载力预示其可为复杂样品提供更为丰富的成分信息。选取藏红花、银杏叶、栀子、射干等中药作为分析对象,进一步证实了 Sephadex LH-20×RPLC系统在中药材分析中的潜在分离能力。最后本研究将构建的Sephadex LH-20 × RPLC联用模式放大到制备规模,选取红花水提物作为研究对象进行全二维在线制备分离和传统一维制备分离,采用高效液相色谱法(HPLC)对化合物进行纯度分析并结合核磁共振、质谱等手段进行化合物结构鉴定与解析。最终,从红花中制备分离得到24个化合物,其中在线制备并鉴定了 11个化合物,离线制备得到并鉴定了 22个化合物。综上,本研究成功构建了一种混合模式Sephadex LH-20 × RPLC二维液相色谱系统,对水溶性样品具有良好的分离效果,为中药材的成分分离提供了一个新的思路。