胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及毒素apxⅢA基因的克隆和表达

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该试验用LMFA-1培养基培养胸膜肺炎放线杆菌LZ02-1株,并对LZ02-1株进行了染色镜检、NAD依赖试验、溶血实验和脲酶试验等生理生化特性试验,结果与文献中的描述一致.另外从湖北、湖南、河南、江西、上海、广东、浙江、山东等地病猪的肺脏中分离出30余株可疑菌株.为了快速检测胸膜肺炎放线杆菌,该研究参考GeneBank上发表的胸膜肺炎放线杆菌外膜脂蛋白(outer membrane lipoprotein,OmlA)U86676的序列,设计合成了1对引物.应用PCR扩增了胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅲ结构蛋白基因(apxⅢA),获得3466bp的扩增产物,用pMD18-T克隆后,连接到pBluescript Ⅱ SK过渡载体上,再连接到pET-28b载体上,转化大肠杆菌BL21,经IPTC诱导表达,通过Western blotting检测到了表达的蛋白质.
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