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亚洲柑橘木虱(Diaphorina citri Kuwayama)属同翅目(Homopetra)木虱科(Chermidae)昆虫,是为害柑橘的重要害虫,是自然界中传播柑橘黄龙病的媒介昆虫之一。现在防治亚洲柑橘木虱以化学农药防治为主,但长期使用化学农药不仅会导致亚洲柑橘木虱抗药性的增加,还会不同程度地污染环境、危害人体健康。因此,人们亟待寻找新型防治亚洲柑橘木虱的生物药剂替代化学农药。粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens KH-001)是从罹病的亚洲柑橘木虱若虫中分离到的具有产红色素能力的致病菌,对亚洲柑橘木虱若虫有较高的杀虫活性,且发酵上清液也可导致亚洲柑橘木虱若虫死亡。为了探究KH-001菌株的杀虫机理,利用qPCR研究了KH-001菌株在亚洲柑橘木虱若虫上的定殖,采用高通量测序技术测定了感染KH-001菌株对亚洲柑橘木虱若虫共生菌的影响,通过DNS比色法对KH-001菌株的几丁质酶活性进行了测定,随后克隆了几丁质酶chia的基因。最后提取了KH-001发酵的灵菌红素粗提物并配置成了乳油制剂可有效防治亚洲柑橘木虱,为亚洲柑橘木虱的防治提供了新方法和田间应用的依据。主要结果如下:(1)亚洲柑橘木虱随着感染时间的增加,其活动能力逐渐降低最终死亡,感染的虫体随着时间的增加会越来越红,死亡虫体轻轻一碰就会流出红色菌脓。(2)通过构建的系统发育树结果表明该菌株属于粘质沙雷氏菌属Serratia marcescens,同时该菌株的生理生化结果表明,KH-001可以利用甘露醇,蔗糖,柠檬酸,棉子糖和葡萄糖产酸,V-P为阳性反应,吲哚和甲基红为阴性,不能利用葡萄糖产气,不能利用丙二酸。KH-001菌株在LB液体培养基中,于37℃,180 rpm下培养生长较为迅速,6 h后进入对数生长期,在12h后已经进入稳定期,在20 h达到最大的生长量,之后开始呈下降趋势。(3)用qPCR对亚洲柑橘木虱若虫体上粘质沙雷氏菌进行了检测,结果表明KH-001菌株数量随着时间的增加而增加,且处理24 h后KH-001菌株的相对含量显著高于1 min处理组和6 h处理组,且与12 h处理组无显著差异。(4)用高通量测序测得KH-001菌株处理后的亚洲柑橘木虱若虫的样本中总共有1331个OTU,利用UPGMA对所占比例最大的10种微生物类群相似性进行了区分,其中Proteobacteria,Firmicutes,Actinobacteria和Bacteroidetes 4种显著类群所占比例均超过了90%。从细菌群落分析发现,四种不同处理的木虱若虫具有34个相同的OTUs,其中PBS(C)处理组的Wolbachia,Anaplasmataceae,Alphaproteobacteria,Gammaproteobacteria,Rickettsiales和Carsonella菌相对丰度均显著高于发酵上清液(A),DH5α(E)和粘质沙雷氏菌(S)组处理的。对四个处理的Serratia,Wolbachia,Profftella和Carsonella相对丰度进行了分析,结果表明S组的Serratia显著高于C,A和E处理组的,而S组处理的Wolbachia相对丰度显著低于C组的,且S组的Profftella和Carsonella均显著低于C,A和E组。(5)该菌株在37℃和28℃培养4 d时,几丁质的酶活力分别为44.55 U/mL和29.95 U/mL,之后从该菌株中克隆到了全长为1863 bp片段,其中含有存在长度为1692 bp的几丁质酶基因chia。(6)从KH-001发酵液中提取出了红色粗提物,称取10%红色粗提物,按乳化剂为农乳500#2.5%,T80 2.5%和0.45%快速渗透剂T,用醋酸仲丁酯补至100%,测得该乳油的自动分散性为良,乳化性为可,乳液稳定性合格。该乳油稀释200倍后,柑橘木虱的校正死亡率为88.89%显著与500倍液处理的85.19%无显著差异,均显著高于1000倍处理组的40.74%,该乳油500倍液可有效用于亚洲柑橘木虱的防治。