肝硬化和原发性肝癌在疾病早期,患者无明显特异性症状,患者确诊时一般已是中晚期,肝硬化、肝癌的早期诊断对疾病的治疗尤为重要。血清蛋白质含量的差异是肝硬化、肝癌患者区别于正常人的特征值之一。近年来,毛细管电泳法因其高效分离、快速分析、微量进样等优势用于蛋白质的分离分析已成为研究热点。毛细管电泳诱导荧光检测法具有较高的灵敏度,在蛋白质检测方面与紫外吸收检测相比,它能更准确的反映血清中蛋白质含量的变化。因此,采用毛细管电泳-发光二极管诱导荧光法对血清蛋白质进行检测,建立正常人、肝硬化和原发性肝癌患者血清蛋白质的毛细管电泳荧光图谱,对比患者与正常人之间血清蛋白质的差异,为临床上肝病的诊断提供参考。研究目的：1.血清蛋白质含量的差异是肝硬化、肝癌患者区别于正常人的特征值之一。本文使用毛细管电泳-发光二极管诱导荧光检测法,对正常人、肝硬化、肝癌患者血清蛋白质进行检测,建立正常人、肝硬化、肝癌血清蛋白质毛细管电泳荧光图谱,对比三者血清蛋白质的差异,辅助临床上肝硬化、肝癌的早期诊断。2.在实验过程中发现,所使用的毛细管电泳仪在一些结构上存在缺陷,如废液池的位置、废液的排出方式等,这些存在的缺陷会降低检测结果的重复性。因此,为了准确地检测血清蛋白质,对一些结构进行改进,以提高毛细管电泳仪的重复性。研究方法：1.毛细管电泳-发光二极管诱导荧光(CE-LED-IF)检测方法中,血清蛋白质的检测依赖于结合在蛋白质分子上的FITC荧光基团,因此,首先对FITC标准品进行CE-LED-IF检测,考察电泳仪检测结果的重复性。研究发现降低检测结果重复性的原因,通过设计合理结构来消除影响,提高检测结果的重复性。2.对CE-LED-IF分离检测血清蛋白质的各个影响因素,如光源的选择、分离毛细管的长度、缓冲液pH值、缓冲液浓度、电泳分离电压、血清稀释比例、衍生用FITC与蛋白质的质量比等进行最优化选择。在最优化的电泳条件下,对正常人、肝硬化、肝癌血清进行电泳分离分析,建立正常人、肝硬化、肝癌患者的血清蛋白质毛细管电泳荧光图谱。研究结果：1.通过重新设计改进电泳卡槽上废液池的位置,消除因毛细管两端高度差带来的影响。改进前后,分别对2.5×10-3mg/mL FITC进行了10次检测。改进前,FITC的迁移时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)是8.74%和6.57%,而改进后,FITC的迁移时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)是1.14%和3.23%,说明改进后的卡槽用于毛细管电泳-LED诱导荧光检测提高了检测结果的重复性。2.分析比较影响CE-LED-IF检测血清蛋白质的各个影响因素：光源、分离毛细管的长度、缓冲液pH值、缓冲液浓度、电泳分离电压、血清稀释比例、衍生用FITC与蛋白质的质量比,确定CE-LED-IF检测血清蛋白质的最优化条件：中心波长470nm的LED作为激发光源,分离毛细管长度为53cm(有效分离长度50cm),缓冲液pH值为9.6,缓冲液浓度为10mmol/L,电泳分离电压为20kV,血清稀释比例为1：40,衍生用FITC与蛋白质的质量比为3：20。3.在最优化的电泳条件下,对60例正常人、肝硬化、肝癌患者的血清进行了电泳分离分析,建立了正常人、肝硬化、肝癌患者的血清蛋白质毛细管电泳荧光图谱。肝硬化、肝癌血清蛋白质毛细管电泳荧光图谱中,有区别于正常人图谱的特征蛋白质峰。结论：1.电泳卡槽的结构改进合理,提高了LED诱导荧光-毛细管电泳检测的重复性。2.电泳分离的影响因素,如光源的选择、分离毛细管的长度、缓冲液pH值、缓冲液浓度、电泳分离电压、血清稀释比例、衍生用FITC与蛋白质的质量比等会影响血清蛋白的检测结果。3.肝硬化、肝癌血清蛋白质毛细管电泳荧光图谱中,有区别于正常人图谱的特征蛋白质峰,可为临床上肝病的诊断提供参考。