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反胶束萃取技术具有成本低,溶剂可反复利用,条件温和不会引起生物活性物质变性,操作简单可以连续生产等优点。谷胱甘肽是一种活性三肽,具有出色的抗氧化作用,在医学、生物学、化学、食品等领域都有广泛的应用。本文制备新型P204/正辛醇反胶束体系;以试剂GSH为原材料,研究反胶束萃取GSH的机制:在pH小于pI条件下,GSH的氨基带正电荷,与阴离子表面活性剂P204和正辛醇组成反胶束中的负电荷氧形成静电相互作用,从而被萃取进入该反胶束。GSH在P204/正辛醇反胶束中的氧化半衰期约为10.9h,与其在水溶液中的氧化半衰期相比,增加了0.8h,增加率为7.3%。Ala、Lys及Asp的游离氨基与GSH的氨基竞争负电荷氧,游离氨基数量越多,与竞争性越强;另外氨基酸分子体积越小,越容易进入反胶束,致使竞争性越强。水相pH值、反胶束含水量W0、阳离子浓度、萃取时间和表面活性剂浓度对萃取GSH有影响。当水相pH值大于2.0时, GSH带正电荷逐渐减少,与P204中负电荷氧的静电引力减弱,萃取率E随pH值的增大而减小; W0为10时,E达到最大,为28.3%;阳离子对P204萃取GSH的影响顺序是:K+>Na+>Ca2+>NH4+, K+、Na+、Ca2+、NH4+的碱性也依次减小,二方面相互对应;阳离子浓度为0.1mol/L时,E达到最大值;超过0.1mol/L后,由于阳离子压缩了反胶束双电层,增强了对GSH与P204间静电引力的屏蔽作用,致使E减小。此时萃取15min即达到平衡。L16(45)正交实验结果指出,萃取GSH的最佳的工艺条件为:水相pH值为2.0;K+浓度为0.1mol/L;萃取时间为15min;表面活性剂的浓度为0.16mol/L,在此条件下GSH的萃取率为33.1%,二次萃取率为49.7%。各因素所选的各水平内,对萃取GSH的影响力大小顺序为:[K+] >含水量W0>水相pH值> [P204]>萃取时间。反萃取水相pH值、Ca2+浓度、萃取时间对GSH的反萃取率Eˊ均有影响。水相pH值在9.0到12.0区间变化时,Eˊ逐渐增大直至平稳;Ca2+浓度在0.2mol/L至0.6mol/L区间变化时,其对GSH与P204间静电引力的屏蔽增强,使得Eˊ逐渐升高;反萃取需45min达到平衡。L9(34)正交实验结果指出,反萃取GSH的最佳工艺条件为:反萃取水相的pH值为11.0;Ca2+的浓度为0.6mol/L;反萃取的时间为45min;相比为1:3;在此条件下GSH的反萃取率可达到52.6%。正交实验选定的各因素的各水平范围内,对反萃取率的影响大小顺序为:反萃取时间>水相pH值> [Ca2+]>相比。