杜仲叶中绿原酸的提取和分离工艺研究

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论文在大量文献调研的基础上,对湖南产杜仲叶活性成分绿原酸 进行了测定、提取和分离的研究,为开发利用杜仲叶提供了实验依据与基础。具体内容摘要如下: (1)建立了一种准确、快速分析测定绿原酸含量的反相高效液相色谱方法,对提取物中绿原酸的色谱分离条件进行优化,确定流动相为甲醇-水-冰醋酸(30:70:0.5,V/V),流速0.6 mI/min,检测波长325nm,柱温控制在25℃;该方法具有高的精密度和准确性,且分析误差小,适用于含量的精确分析。同时,对分光光度法测定绿原酸含量的方法也进行了研究,该方法实验条件易控制,操作简单,快速,可应用于绿原酸制备过程中绿原酸含量的跟踪测试; (2)研究了常规浸提法从杜仲叶中提取绿原酸的最佳工艺条件。提取杜仲叶中绿原酸的理想溶剂为磷酸氢二钠—柠檬酸缓冲溶液;通过条件试验确定了提取绿原酸的最佳工艺条件,即用pH为5.0的磷酸氢二钠—柠檬酸缓冲溶液提取杜仲叶样品三次,料液比为1:15,提取温度为70℃,提取时间lh,绿原酸的提取得率达0.955%: (3)研究了酶法从杜仲叶中提取绿原酸的最佳工艺条件。通过条件实验和正交试验确定了果胶酶法提取绿原酸的最佳工艺条件,即在pH为3.6的缓冲液中酶解杜仲叶样品,加入O.5%的果胶酶溶液2.0 mL,在60℃下酶解2小时,酶解后再在70℃下提取2次,绿原酸的得率达1.29%: (4)系统研究了半仿生法从杜仲叶中提取绿原酸的工艺,得到了半仿生法最优提取条件,以绿原酸的得率为指标,考察提取温度、提取时间、pH以及料液比对绿原酸得率的影响。得到的最佳工艺条件为:以杜仲叶为原料,以磷酸氢二钠—柠檬酸的缓冲溶液作为提取液,料液比为1:20,提取液pH分别为2.0、7.5、8.3,在70℃的温度下,每次提取lh,提取3次。在此条件下,绿原酸的得率达1.44%: (5)应用陶瓷膜分离设备,将提取液作为处理对象,经超滤处理。以绿原酸和多糖的截留率和膜面通量作为考察指标,对超滤的操作压力和料液温度等操作条件进行了研究。选择超滤温度30℃和超滤压力O.17MPa,时间60min为膜过滤的最佳条件。 (6)采用常压硅胶层析法分离绿原酸初步纯化后产品,得到高纯度的绿原酸单体。对硅胶层析纯化绿原酸的操作条件进行优化,采用硅胶将样品低温吸附,挥发去除溶剂,烘干后上柱,用不同配比的氯仿和甲醇混合液洗脱,同时用高效液相色谱法跟踪检测。采用本工艺进行分离精制,可使绿原酸含量从25%左右提高到90%以上,可获得纯度大于92.63%的绿原酸纯品。
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