不同时间拆卵对胚胎异常受精和发育的影响

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目的:受精障碍或受精率低下(<30%)是体外受精-胚胎移植(In Vitro Fertilization-embryo transfer, IVF-ET)中困扰辅助生殖技术工作者的常见问题之一。目前,在我国不孕症患者求医问药完全自费的国情下,一旦发生此问题将会极大加重患者的经济和心理负担。随着生殖医学的不断发展,如何防范受精失败或受精率低下已引起生殖医学工作者的热切关注。短时受精的出现为胚胎学家及早观察卵母细胞是否激活,及尽早进行补救提供了前提条件。但是在过早地对受精胚胎进行机械性脱落颗粒细胞是否会影响其受精卵的正常受精或是影响其胚胎的后期发育潜能还不明确。因此本研究的目的是探讨这种机械性操作是否会影响受精卵的正常受精过程,或者是否会影响其胚胎的后期发育和妊娠结果。方法:收集2010年1月至2013年2月期间在盐城市妇幼保健院生殖医学中心接受常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗,年龄在22-38岁之间,获卵数大于5枚的165例不孕症患者。在取卵后4小时,将每位患者的卵母细胞与精子共培养4小时,然后随机分为2组(A组和B组),A组为选择获卵数1/3-1/2左右的受精卵在加精4小时后轻柔的脱去卵母细胞周围的颗粒细胞直至能清晰的观察到卵母细胞的第二极体(Second Polar Body, PB2),若PB2>50%,则认为IVF受精成功;若PB2<50%,再观察2小时极体排出情况,在受精6小时后如果PB2<50%,那就对只有一个极体的卵母细胞进行补救措施。而B组为拆除卵母细胞颗粒细胞所剩余的受精卵,在加精4小时后不拆除颗粒细胞而直接移入另一个新鲜胚胎培养基中待16小时后(次日)再进行剥离颗粒细胞观察原核情况。最终对比两组之间的总受精率、2PN受精率、PB2受精率、1PN受精率、0PN受精率、多精受精率、总卵裂率、Ⅰ级胚胎率、Ⅱ级胚胎率、Ⅲ级胚胎率、Ⅳ级胚胎率以及可利用胚胎率和优质胚胎率、临床妊娠率、胚胎植入率、单胎率、双胎率、异位妊娠率、流产数和胚停数。结果:1)A组短时受精4小时后轻柔的脱去外周颗粒细胞的受精卵与B组短时受精4小时后不拆除颗粒细胞直接移入另一新鲜培养基中待16小时后(次日)再进行剥离颗粒细胞的卵母细胞在总受精率、2PN受精率、PB2受精率、1PN受精率、0PN受精率、多精受精率之间差异不显著(P>0.05)。2)A组和B组的卵裂胚胎在第三天的总卵裂率、Ⅰ级胚胎、Ⅱ级胚胎、Ⅲ级胚胎、Ⅳ级胚胎以及可利用胚胎率和优质胚胎率之间差异不显著(P>0.05)。3)将A组和B组的胚胎在发育至第三天后进行移植和玻璃化冷冻之后所剩余的胚胎分别转入囊胚培养液中进行继续培养观察其囊胚形成率和优质囊胚形成率,判断其后期的发育潜能,结果发现A组的剩余胚胎在形成囊胚和优质囊胚率上显著低于B组的剩余胚胎(P<0.05)。4)分别将A组和B组的胚胎在第三天单独分开进行移植,在所移植患者的年龄和子宫内膜无统计学差异的基础上,对比这两组胚胎的临床妊娠率,胚胎植入率,单胎率,双胎率,异位妊娠率,流产数和胚停数。结果发现两组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:1)短时受精4小时后轻柔的脱去卵母细胞外周的颗粒细胞不会对胚胎的总受精率、多精受精率、正常受精率、异常受精率、总卵裂率、可利用胚胎率和优质胚胎率有显著地影响。但是短时受精4小时后立即拆除颗粒细胞的这种机械性操作对移植和冷冻后剩余胚胎发育成囊胚和优质囊胚的形成率上有显著影响。2)对于短时受精4小时后对少数胚胎进行颗粒细胞拆除这种方法,既不影响整体胚胎异常受精的发生,也不会影响整体胚胎后期发育的潜能,并且通过观察卵母细胞第二极体的排出现象对其余胚胎的受精情况有一定的预见作用,同时也能避免受精障碍或者受精率低下现象的发生,提高不孕患者的胚胎利用率。
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