论文部分内容阅读
目的： 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）是否通过 PI3K/Akt信号途径诱导人宫颈癌 Hela细胞发生上皮间质转化(EMT)，并促进迁移和侵袭。 方法: 将实验分为4组分别为：①对照组：加入等量 PBS作为对照。②TGF-β1组：用 TGF-β1（10ng/ml）处理 Hela细胞。③TGF-β1+LY294002(PI3K抑制剂)组：用LY294002（20μmol/L）预处理Hela细胞1h后，再加入TGF-β1继续培养。④LY294002组：用LY294002（20μmol/L）处理Hela细胞。 1．48h后用倒置显微镜观察4组细胞形态学变化。 2.用 Transwell小室检测3组(对照组、TGF-β1组、TGF-β1+LY294002组)细胞的迁移和侵袭能力变化。 3. Western blot法检测四组细胞中的p-PI3K蛋白、p-Akt（Thr308）蛋白、E-cadherin（E-钙粘蛋白）、Vimentin（波形蛋白）的表达变化。结果:1.对照组细胞呈现显著的上皮细胞样表型。 TGF-β1组细胞呈现间质细胞样表型。LY294002组及LY294002+ TGF-β1组细胞聚集成团，呈长梭型或圆形，未呈现明显的间质细胞样表型。 2.迁移实验发现TGF-β组穿过小室的细胞数目（67.0±5.0）个与对照组（39.5±4.4）个相比明显增多。与LY294002+TGF-β1组相比，LY294002+TGF-β1组穿过小室的细胞数目（51.3±2.2）个较 TGF-β1组显著减少，其差异均具有统计学意义（P<0.01）。侵袭实验结果发现TGF-β1组穿过小室的细胞数目（53.5±2.9）个较对照组（31.5±2.1）个、LY294002+TGF-β1组（42.8±3.3）个均明显增多，其差异均具有统计学意义（P<0.01）。 3. Western blot法检测结果：（1）在对照组人宫颈癌Hela细胞内p-PI3K、p-Akt(Thr308)的表达水平较低；经 TGF-β1处理后Hela细胞内的p-PI3K、p-Akt表达水平显著增加；经 LY294002处理及LY294002预先干预后再加入TGF-β1处理Hela细胞后，发现Hela细胞内 p-Akt、p-PI3K表达水平均明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。（2）在对照组人宫颈癌Hela细胞内E-cadherin表达水平高，Vimentin表达水平低； Hela细胞经 TGF-β1作用后，其内的vimentin表达升高， E-cadherin表达下调；经 LY294002处理及LY294002预先干预后再加入 TGF-β1处理 Hela细胞后，其内E-cadherin表达水平均增加、Vimentin表达水平减少，差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论： 1.TGF-β1可能诱导人宫颈癌Hela细胞获得间质细胞特征，促进EMT的发生。 2.TGF-β1作用于 Hela细胞后，激活 PI3K/Akt信号通路，诱导其EMT发生，促进其迁移和侵袭。