BmCPV-SZ全基因组序列测定与分析及其多角体蛋白包装特性的研究

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家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cypovirus,BmCPV)是家蚕幼虫的病原微生物之一,可以引起家蚕中肠性脓病,给养蚕业带来很大的损失。对BmCPV基因组进行克隆与分析可以为深入研究该病毒基因组的功能以及致病机制提供依据,对于蚕病预防具有重要的指导意义。本研究对苏州分离到一株家蚕质型多角体病毒(命名为家蚕质型多角体病毒苏州株,Bombyx mori cypovirus Suzhou strain,BmCPV-SZ),通过病毒纯化、核酸提取、片段分离、RT-PCR和克隆,对该病毒全基因组序列进行了测定。为了解该病毒的进化起源和基因组编码蛋白的功能,利用生物信息学方法对基因组序列及编码蛋白进行了系统的分析。为了研究多角体蛋白对异源物质的包装机制,在对BmCPV-SZ基因组片段S10多角体蛋白基因(polh)进行克隆和序列分析的基础上,克隆到昆虫表达载体pIZT/V5-His,构建真核表达载体pIZT/V5-His-polh,然后转染BmN细胞,经Zeocin抗生素筛选获得了稳定表达的细胞系。根据PCR检测结果,确定polh已经在细胞中获得表达,同时细胞中可以观察到颗粒状结晶多角体的形成。用线性化病毒BmPACK6感染细胞,收集并纯化多角体经回感实验可以初步确定该蛋白可以对线性化杆状病毒BmPACK6进行异源包装。另外,研究还对小菜粉蝶颗粒体病毒lef-3基因进行了克隆和序列测定,并利用生物信息学方法对该基因及编码蛋白进行了分析。
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