酪蛋白非磷肽Na2SeO3的制备、表征及抗氧化功能的研究

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从市售酪蛋白中分离提取出酪蛋白非磷肽(Casein non-phosphopeptides, CNPPs),研究了CNPPs与Na2Se03发生结合反应的最佳工艺条件,制得高含l硪量的酪蛋白非磷肽Na2SeO3(Casein non-phosphopeptides Na2SeO3)。采用氢化物原子荧光光谱法(Hydride generation-atomic fluorescence spectrometry, HG-AFS)、透射电镜(Transmission electron microscope, TEM)和红外光谱(Infrared Spectroscopy.IR)结果分析相结合的方法,对酪蛋白非磷肽Na2SeO3进行了表征探究。采用总抗氧化能力(TEAC)测定的方法,对酪蛋白非磷肽Na2SeO3的抗氧化能力进行了初步判定,并通过动物试验对其抗氧化能力进行验证,同时,探究了酪蛋白非磷肽Na2SeO3对小鼠体重、脏器指数和血液学指标三个常规指标的影响。试验一:酪蛋白非磷肽Na2SeO3的制备。选用碱性蛋白酶(Alcalase)水解酪蛋白获得CNPPs和酪蛋白磷酸肽(Casein phosphopeptides, CPPs)的混合物,通过钙乙醇沉淀法分离提取出CNPPs,以含硒量为参照指标,研究了CNPPs与Na2SeO3发生结合反应的工艺条件,先通过单因素试验分别确定反应时间、温度、pH三个因素对含硒量的最佳影响范围,再通过正交试验确定最佳反应条件为:反应时间2h,反应温度60℃,反应pH 7。在此条件下制得的酪蛋白非磷肽Na2SeO3的含硒量约为3.28 mg/g。试验二:酪蛋白非磷肽Na2SeO3表征的初步研究。通过观察CNPPs与Na2SeO3反应前后颜色变化,采用TEM结果分析以及IP测试相结合的方法,对酪蛋白非磷肽Na2SeO3进行了表征研究。结果表明,CNPPs与Na2SeO3在加热条件下化学键发生迁移,分子之间发生了重排,反应生成的新物质即为酪蛋白非磷肽Na2SeO3,该物质为红色纳米级颗粒物,其直径大小保持在45 nm左右。试验三:酪蛋白非磷肽Na2SeO3抗氧化能力的研究。CNPPs与Na2SeO3反应前后TEAC的提高率可达57.70%,可见CNPPs与Na2SeO3具有显著的协同抗氧化能力。动物实验期间,每日定时定量向试验小鼠饲喂不同剂量的酪蛋白非磷肽Na2SeO3,根据饲喂样品的种类和硒剂量的不同,将试验小鼠分为酪蛋白非磷肽Na2SeO3组(剂量适合组、剂量临界组)、Na2SeO3组(剂量适合组)、酵母硒组(剂量适合组)和常规饲料组。以Na2SeO3组、酵母硒组和常规饲料组为对照,将超氧化物歧化酶活性(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶活性(GSH-PX)、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛含量(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平作为试验指标,研究了酪蛋白非磷肽Na2SeO3对小鼠在抗氧化能力方面的作用。结果表明:酪蛋白非磷肽Na2SeO3表现出比其他补硒试剂更为显著的抗氧化能力,相同剂量前提下,补充酪蛋白非磷肽Na2SeO3的雄性小鼠血清的T-SOD、GSH-Px和T-AOC三个抗氧化指标,雌性小鼠血清的GSH-Px、T-AOC和GSH四个指标都表现出更为显著的差异;随着酪蛋白非磷肽Na2SeO3剂量的增加,机体抗氧化酶的活性和抗氧化能力显著提高。试验四:酪蛋白非磷肽Na2SeO3影响机体补硒效果的研究。动物实验期间通过对小鼠的体重、脏器指数、红细胞数(RBC)、血红蛋白浓度(Hb)、白细胞数(WBC)、红细胞压积(HCT)、血小板数(PLT)几种常规指标的测定,探究了酪蛋白非磷肽Na2SeO3对小鼠的补硒效果。结果表明:酪蛋白非磷肽Na2SeO3补硒组在小鼠的生长性能、肝脏指数和肾脏指数方面具有显著功效,但对小鼠心脏指数、脾脏指数、血液学指标以及雌性小鼠的肺脏指数无显著影响:酪蛋白非磷肽Na2SeO3临界剂量组能显著提高雄性小鼠的肺脏指数,适合剂量组对其则无显著影响。
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