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用从胶州湾大规模死亡栉孔扇贝体内分离出来的球状病毒注射感染栉孔扇贝(Chlamysfarreri),采用流式细胞术,研究了病毒对栉孔扇贝血细胞类型、血细胞各亚群比例及血细胞死亡率的影响;用荧光显微技术,研究了病毒感染的栉孔扇贝血细胞的体外吞噬和包囊化作用的变化,采用分光光度技术,研究了病毒对栉孔扇贝血细胞和血清中参与免疫防御的水解酶、氧化酶、活性氧(ROIs)和一氧化氮(NO)等体液因子的影响,采用酶组织化学方法对经病毒感染的栉孔扇贝主要器官中非特异性酯酶(NSE)和过氧化物酶(POD)活力和分布进行了研究。结果表明:
应用流式细胞术散射光发现栉孔扇贝血细胞被明显地分为3个类群:透明细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞,经病毒感染的栉孔扇贝血细胞也分为这3个类群,但病毒感染的扇贝血细胞各亚群的比例同对照组相比有显著的差异,在24h、48h和72h,实验组透明细胞比例显著高于对照组,并呈逐渐升高趋势;在8h、24h、48h、72h,实验组大颗粒细胞比例显著降于对照组;在24h、48h、72h和128h,实验组血细胞的死亡率显著高于对照组。
经吖啶橙(AO)染色、荧光显微镜观察发现在病毒感染期间实验组扇贝血细胞的体外吞噬率和包囊化作用都显著高于对照组,随着病毒感染时间的延长扇贝血细胞吞噬率和包囊化率呈逐渐升高又降低的趋势。
应用分光光度技术发现经病毒感染的栉孔扇贝血清中活性氧H2O2含量和依赖卤素的髓性过氧化物酶(MPO)活性在病毒感染的各个时间段,实验组显著高于对照组,血细胞中的酶活性实验组低于对照组;NSE、不依赖卤素的MPO活性和NO含量在血清和血细胞中,实验组显著高于对照组。
酶组织化学方法研究表明NSE和POD随着病毒感染时间延长在各个组织中的活性呈逐渐增强趋势,而且酶活性在各个组织的上表皮细胞和与外界直接接触的组织中比较强,说明这两种酶在扇贝抵御病毒的免疫防御机制中发挥了重要作用。