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本研究首先从铜绿假单胞菌临床分离株中,筛选非粘液型菌株8株,粘液型菌株50株,用比色法测量两种菌株的藻酸盐合成量;PCR-SSCP和基因测序法检测藻酸盐合成调节基因,位于染色体68min处的mucA基因突变与细菌菌落形态的关系;进一步用亚致死量H2O2作为诱变剂对临床分离的3株非粘液型菌株进行诱导mucA基因突变,同时用扫描电镜(SEM)观察H2O2对细菌形成生物被膜的影响。实验中引入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC),观察其是否可以对抗过氧化氢,阻止mucA基因的诱导突变,同时SEM观察NAC对生物被膜形成的影响;最后用MTT法计数生物被膜中细菌数量,来观察NAC与左氧氟沙星(LFX)联合应用对铜绿假单胞菌生物被膜的影响。
分析了过氧化氢诱导细菌基因突变的实验中,发现1株非粘液型临床分离PAmucA基因发生了突变,另外2株则未检测到突变,突变位点为352位C→T单碱基置换,在352位提前出现终止密码子的特性。
总结了单用LFX须1MIC以上浓度才能使BF内活菌数明显下降,小剂量NAC(0.5mg/ml)能够协助1/2MICLFX使BF内活菌数明显下降,NAC对LFX协助杀菌作用呈浓度依赖性。NAC与LFX合用对铜绿假单胞菌生物被膜的抑制具有明显的协同作用。