发根农杆菌介导的银中杨茎段遗传转化体系的建立及生理生化指标的测定

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杨树是杨柳科(Salicaceae)杨属(Populus)落叶乔木植物的通称,银中杨(Populus alba×P.berolinensis)是银白杨(p.alba Linn)与中东杨(P.Berolinensis Dipp.)经过杂交选育出的新型树种。银中杨是园林绿化的优良树种之一,但其扦插生根难,育苗成活率低的特点均是银中杨育种所面临的难题。因此,改良银中杨的性状、增加其对生存环境适应能力的意义重大。本实验选用银中杨当年生的幼嫩枝条作为植物材料,经过外植体的取材及消毒灭菌、预培、侵染、共培、卡那霉素(Kan)筛选、PCR分子鉴定及PCR产物测序等步骤,建立了发根农杆菌介导的银中杨遗传转化体系,确定银中杨遗传转化侵染最佳菌液OD600值为0.6,最佳侵染时间为30 min,最佳外植体为茎段的上段,Kan最小致死浓度为30 mg/L,转化植株基因组经过PCR分子鉴定及PCR产物测序,初步建立了发根农杆菌介导的银中杨茎段遗传转化体系。以银中杨转化植株为实验材料,对转化植株的株高、叶数、叶面积、茎粗、节间长度以及根系的根总长、根总表面积、根总体积、根总投影面积、根尖数、分枝数、单位平方米土壤总根长、平均根直径等形态学指标;丙二醛(MDA)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)等抗氧化酶活力;净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Gs)、细胞间隙CO2浓度(Ci)、水分利用效率(WUE)等参数;光系统II的相对电子传递速率(ETR)、实际光化学量子产量(ΦPSII)、光化学淬灭(qP)、非光化学淬灭(NPQ)、PSⅡ反应中心光化学效率(Fv/Fm)、光能转化能力(Fv/Fo)等叶绿素荧光参数进行测定与分析。形态学指标分析:转化植株株高矮化,节间变短,叶面积减小,生长速度高于同时期生长的对照植株;转化植株总根长、总根表面积、根体积、总根投影面积、根尖数、分枝数、单位平方米土壤总根长、平均根直径均大于对照植株,说明转化植株的根系庞大、侧根较多,有利于植株更好的吸收水分及养分,供给地上部分生长发育。抗氧化酶含量分析:转化植株中丙二醛(MDA)活力低于对照植株,说明转化植株所积累的损害植物膜系统的活性氧自由基积累的较少,转化植株超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)的活力大于对照植株,说明转化植株有着较强的清除自由基的能力,更好的维持活性氧代谢平衡。光合特性分析:转化植株净光合速率(Pn)高于对照植株,蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Gs)与净光合速率(Pn)的变化趋势呈正比,均随着光强的增加而先升后降,水分利用效率(WUE)的变化趋势与气孔导度(Gs)成反比,即随着光强的增加先降后升,细胞间隙CO2浓度(Ci)随着光强的增加而逐渐上升。同一光强下,转化植株的Pn、Tr、Gs、WUE、Ci值大于对照植株,说明转化植株具有较高的光合速率,对水的利用能力及光能的转化能力较强。叶绿素荧光动力学分析:转化植株光系统II的相对电子传递速率(ETR)、实际光化学量子产量(ΦPSII)、光化学淬灭(qP)、非光化学淬灭(NPQ)大于对照植株,说明与对照植株相比,转化植株激发能的捕获效率、光能利用能力较高,转化植株能够及时将多余的光能通过热耗散的形式散发出去,PSⅡ反应中心光化学效率(Fv/Fm)、光能转化能力(Fv/Fo)、实际光化学量子产量(ΦPSII)、光系统II的相对电子传递速率(ETR)、光化学淬灭(qP)的总体变化趋势说明,转化植株具有较高的光化学效率,对光照强度的变化有较强的适应性,具有较强的光合作用能力。本实验所获得的银中杨新种质材料,为提高银中杨抗逆能力的基因工程育种研究奠定理论基础。
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