乙酸烯丙醇酮酯选择性水解菌种的筛选

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烯丙菊酯是拟除虫菊酯家族中一类重要的杀虫剂,对室内昆虫具有快速杀灭的特效,并且对人畜无害。4-羟基-3-甲基-2-2-(2-烯丙基)-环戊烯酮(简称HMPC),是合成烯丙菊酯的重要中间体。HMPC的两个对映体中,(S)-构型是活性组分,含有(S)-HMPC的烯丙菊酯的杀虫活力是消旋烯丙菊酯的4倍。因此,开发制备(S)-HMPC具有重要意义。 本文从土壤中分离得到250株菌株,经过反复筛选,从中挑选出一株能够高选择性水解(R)-乙酸烯丙醇酮酯的菌株C61。经过生理生化实验鉴定该菌株为花园芽孢杆菌。对C61进行培养条件优化,得到产酶的最佳培养基组成为:黄豆饼17.8g/l,橄榄油10.2g/l,(NH42SO4 2g/l,K2HPO4 1.78g/l,NaCl 1 g/l,MgSO40.2g/l,pH 7.0。最佳培养条件为:种龄为18h,接种量为10%,培养温度为30℃,初始pH为8.0,装液量为5%,培养时间为24h。经过上述优化后,酶产量由最初的94U/l提高到了585U/l,提高了约5倍。通过转化条件优化得到最佳反应条件为:温度30℃,pH为8.5,摇床转速为240rpm,E值由44提高到了70。最后考察了不同底物浓度下酶反应过程曲线。如果要获得高光学纯度的(R)-烯丙醇酮,在底物浓度45mmol/l,转化率为37%,此时eep可达96%;在底物浓度180mmol/l,转化率达到53%时,ees可达95%,此时可得到高光学纯度的(S)-乙酸烯丙醇酮酯,收率为47%。
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