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Ⅱ型糖尿病是一种病理机制复杂的代谢紊乱疾病,胰岛素抵抗是它的重要特征及致病因素之一。在Ⅱ型糖尿病中,胰岛素抵抗会导致肌肉组织对血浆葡萄糖摄取障碍,同时引起胰脏胰岛素分泌功能损伤,最终导致机体血糖浓度失调。葡萄糖转运是机体利用及摄取葡萄糖的限速环节,该过程中细胞分子机制已成为糖尿病研究的重要目标。哺乳动物中,葡萄糖摄取的重要载体-葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)主要在肌细胞、脂肪细胞中表达。机体通过调解GLUT4从胞内富集区域到膜表面转运来调解骨骼肌等细胞的葡萄糖摄取。作为胰岛素通路等众多调控通路的最终效应单位,GLUT4对于机体维持葡萄糖内稳态起关键作用,是研究糖尿病的重要靶点。大量GLUT4相关研究集中在利用生物化学方法对胰岛素调控通路以及分子转运进行检测,然而对于这个重要靶点,更高水平的实时检测技术以及对GLUT4具体转运过程的深入探讨显得越来越重要。本研究以骨骼肌细胞作为重要的机体葡萄糖吸收、储存以及利用的重要靶细胞和相关胰岛素调控通路的调控机制为理论依据,选取骨骼肌细胞系C2C12作为研究对象,建立基于全内反射荧光显微技术及激光共聚焦扫描显微技术的C2C12细胞GLUT4荧光示踪实时近膜观测模型;测定细胞内GLUT4囊泡转运过程,讨论从分布到转运到锚定融合等时间/空间层次机制,确定转运特征,融合等识别标准;探讨胰岛素刺激条件下,相关物理状态变化。通过实验研究得出以下结果:1.基础状态下GLUT4大部分分布于细胞核附近的高尔基网状结构附近;2.与脂肪细胞相关结论不同,C2C12细胞中GLUT4与IRAP并非装配在相同的运载囊泡中;3.获取C2C12细胞GLUT4囊泡转运的实时图像,并研究了转运的运动特征:沿一定轨迹在近膜区域进行不同距离的转运运动,具有双向运动性以及同一路径的运动特性,囊泡在质膜发生融合;4.在胰岛素的刺激下GLUT4囊泡的转运活动变得更加剧烈。本研究建立C2C12细胞GLUT4近膜区域实时检测平台,对GLUT4转运时空特性进行了探讨,为寻找新的糖尿病药物靶点,甚至是胞内靶点提供相关实验及理论依据。有关基于C2C12细胞的GLUT4近膜领域实时转运研究未见相关报道。