【摘 要】
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目的:研究黄癸素对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞、小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞及其原位移植瘤侵袭转移的抑制作用,以及对上皮-间质转化相关因子的调节作用。方法:（1）体外细胞试验:MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室实验检测细胞侵袭趋化能力;逆转录-实时荧光定量聚合酶链式反应（Reverse transcription-real time
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目的:研究黄癸素对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞、小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞及其原位移植瘤侵袭转移的抑制作用,以及对上皮-间质转化相关因子的调节作用。方法:（1）体外细胞试验:MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室实验检测细胞侵袭趋化能力;逆转录-实时荧光定量聚合酶链式反应（Reverse transcription-real time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR）及蛋白质免疫印迹（Western Blot）检测E-cadherin、N-cadherin、TGF-β1及CD44v6 m RNA和蛋白的表达。（2）小鼠移植瘤试验:MDA-MB-231、4T1细胞分别在裸鼠和BALB/C小鼠皮下接种成瘤,采用第2代瘤块乳腺脂肪垫接种法建立MDA-MB-231细胞裸鼠乳腺原位移植瘤和4T1细胞BALB/C小鼠乳腺原位移植瘤模型:裸鼠于接种后30d分组,包括阴性对照组、黄癸素不同剂量组（75、100、133 mg/kg）以及阳性对照组（环磷酰胺50 mg/kg）,每组动物数6只,灌胃给药（每日1次,阳性对照组第6天起每3天一次）,给药17d后麻醉取瘤,瘤组织采用Western Blot检测E-cadherin、N-cadherin、TGF-β1及CD44v6蛋白的表达情况,动物继续饲养34天后安乐死,观察原位复发情况;BALB/C小鼠于接种后9d分组,每组8只,组别及给药方法同裸鼠试验,给药13d后麻醉取瘤,动物继续给药10d后安乐死,取小鼠全肺计数肺结节数,并进行肺组织标本HE染色观察肺转移情况。对原位肿瘤增殖的抑制活性以相对肿瘤增值率（T/C）和抑瘤率为评价指标。结果:采用对细胞增殖和凋亡无显著影响的体外实验浓度（0.4、0.6、0.8μg/m L）进行黄癸素干预,结果显示:黄癸素可抑制MDA-MB-231细胞的迁移,并具有浓度依赖性,高浓度组细胞迁移率较对照组降低31%（P<0.01）。小室侵袭和迁移实验中,黄癸素能抑制MDA-MB-231细胞的侵袭,高浓度组的细胞侵袭数为74.0±5.9,显著低于对照组的205.0±6.7（P<0.01）,细胞迁移数为281.0±19.8,显著低于对照组的585.0±20.3（P<0.01）。RT-q PCR检测结果显示黄癸素干预后,MDA-MB-231细胞中E-cadherine m RNA表达量与对照组相比显著增加,而N-cadherine、TGF-β1及CD44v6 m RNA表达量显著降低。Western Blot检测结果表明黄癸素可上调E-cadherin蛋白水平,下调N-cadherin、CD44v6 m RNA及蛋白表达,对TGF-β1蛋白表达有一定的浓度依赖性下调趋势。MDA-MB-231细胞裸鼠乳腺原位移植瘤在体试验中,黄癸素低、中、高剂量组抑瘤率分别为24.7%、47.8%和56.1%,相对肿瘤增值率（T/C值）分别为66.3%、37.8%和37.0%,均提示中、高剂量组有显著抑制效果（P<0.05）。取瘤后34天复发数（复发率）为:对照组为5（83.3%）,低、中、高剂量组分别为2（33.3%）、2（33.3%）和1（16.7%）,均显著低于对照组（P<0.01）。原位瘤组织相关蛋白表达的检测结果显示,黄癸素可上调E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin、CD44v6蛋白表达,并具有剂量依赖性下调,对TGF-β1蛋白表达也有一定的剂量依赖性下调趋势。4T1细胞BALB/C小鼠乳腺原位移植瘤在体试验中,不同剂量黄癸素干预下有剂量依赖性抑制的趋势,其中高剂量组作用显著,抑瘤率和T/C值分别为41.5%、52.5%（P<0.05）。对肿瘤肺转移的影响呈现剂量依赖性减少,低、中、高剂量组肺部结节数分别为11.7±3.4、9.7±1.8和5.4±1.1,与对照组肺部结节数15.7±3.3比较,高剂量组具有显著性差异（P<0.05）。结论:黄癸素可抑制MDA-MB-231细胞侵袭迁移,且抑制其在裸鼠乳腺原位生长和复发,并能抑制4T1细胞BALB/C小鼠乳腺原位移植瘤生长及肺转移,其抗侵袭转移作用的机制可能系通过调节上皮-间质转化相关因子E-cadherin、N-cadherin、TGF-β1及CD44v6的表达。
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