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目的:检测女性盆腔脏器脱垂(pop)患者子宫主韧带和阴道前壁中RECK的表达,探讨其表达变化与POP发生发展的关系。
材料与方法:
一、材料
40例POP患者的主韧带、膨出阴道前壁组织及10例非脱垂患者的主韧带及阴道前壁组织来自2009年3月到2010年3月间中国医科大学附属盛京医院妇科手术切除的组织。所有组织均经福尔马林固定,常规石蜡包埋。
二、主要试剂
兔抗人RECK单克隆抗体购自武汉博士德公司。S-P试剂盒及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物公司。
三、方法
采用免疫组织化学染色方法,按链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)法行免疫组织化学染色。切片常规脱蜡至水,高温高压进行抗原修复,一抗4℃孵育过夜,DAB显色,苏木素复染。用PBS代替一抗作为阴性对照。结果判定:细胞外基质内见棕黄色颗粒为阳性表达。评分标准:应用计算机图像分析仪分析各组RECK免疫组织化学染色的阳性区平均灰度值。在图像分析中,免疫组织化学染色的强弱与灰度值成正比关系,阳性物质越高,染色越深,灰度值越大。
四、统计学分析
采用SPSS13.0软件包进行统计学处理。RECK蛋白表达和POP临床病理特征的关系用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
结果:RECK在盆底组织的表达阳性呈黄色或棕黄色,主要定位于细胞外基质,阳性表达呈弥漫性分布,POP组和对照组患者盆底组织中均见RECK阳性表达,RECK在对照组的主韧带及阴道壁平均灰度值(90.7±2.90;90.3士3.84)明显高于Ⅱ度、Ⅲ度和Ⅳ度盆腔脏器脱垂患者(86.4士3.44,82.2±3.20,81.9±3.06;86.1士4.35,81.3士4.04,80.2士2.66),差异有统计学意义;在对照组的平均灰度值与Ⅰ度盆腔脏器脱垂者的平均灰度值未见明显差异;Ⅲ度和Ⅳ度盆腔脏器脱垂患者中的主韧带及阴道壁平均灰度值(82.2±3.20,81.9±3.06;81.3±4.04,80.2±2.66)明显低于Ⅰ度和Ⅱ度盆腔脏器脱垂者的平均灰度值(90.2±3.66,86.4±3.44;89.9士3.75,86.1±4.35),差异有统计学意义。而RECK蛋白表达与患者绝经状态及阴道分娩次数无关。
结论:POP患者盆底结缔组织RECK蛋白表达降低,并与脱垂程度相关,与患者是否绝经及阴道分娩次数无关。