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采用8个棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)代表菌系和33个北方菌系,在温室条件下,选用鄂荆1号(感)、中-12(耐)、文5(抗)和唐棉2号(抗)4个不同的棉花品种进行致病性测定,其结果根据病株落叶与否可将供试菌系分为落叶型与非落叶型两类。 选用25对EcoRI和MseI引物组合,对供试的41个V.dahliae进行AFLP扩增,筛选到两对引物E64(GACTGCGTACCAATTCGAC)、M53(GATGAGTCCTGAGTAACCG)和E49(GACTGCGTACCAATTCCAG)、M65(GATGAGTCCTGAGTAAGAG),能分别扩增出433bp和110bp两条仅为V.dahliae非落叶型菌系独有的特异片段,可将落叶型与非落叶型菌系分开,这两条特异片段被命名为EM433和EM110。 将特异片段EM433进行回收、克隆、测序,在此基础上设计并合成两条SCAR标记引物5’-CGAGACGTCCGAGTCGATATAGC-3’和5’-GTCGTCCTTCTAGTGGGTATCCTCC-3’,对41个V.dahliae进行扩增,10个非落叶型菌系中有9个菌系可以扩增出特异片段,31个落叶型菌系中29个菌系无此特异片段,鉴定准确率可达90%以上。故此,该EM433条带可以用于鉴别非落叶型菌系。 从25对引物中,选取其中多态性丰富的8对,统计带型整齐清晰且有多态性的扩增条带,共169条作系统聚类分析,将上述菌系分为两大类,第一类包括10个非落叶型菌系和1个过渡菌系;第二类包括30个落叶型菌系类,4个落叶型对照菌系和26个北方菌系。分析聚类树状图,发现菌系在地理来源上存在一定的相关性,但依据菌系致病力强弱划分类群,则相关关系不大。