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目的 观察促红细胞生成素(EPO)对视网膜缺血的防治作用,探讨其对视网膜缺血神经元保护的可能机制。 方法 应用前房加压法制作大鼠视网膜缺血模型,36只雄性Wistar大鼠随机分为正常组4只,其余32只分为生理盐水组和EPO组。EPO组及生理盐水组于模型制作前24h腹腔分别注射rhEPO(5,000U/kg)及等量生理盐水,再根据灌注时间的不同,又分为再灌注后12、24、48、72h组。EPO检测观察EPO在大鼠视网膜的表达。苏木精-伊红(HE)染色和TUNEL法检测观察EPO组及生理盐水组视网膜神经元的存留。应用免疫组织化学方法检测Caspase-2、Bcl-2、Fas、FasL蛋白的表达。 结果 (1)EPO检测:缺血组大鼠和正常组大鼠视网膜皆可见EPO的表达,且其表达主要见于大鼠视网膜内层。缺血再灌注24h后,大鼠视网膜EPO的阳性染色减少。缺血再灌注48h,大鼠视网膜EPO的阳性染色急剧减少到正常组大鼠的50%。 (2)HE染色:生理盐水组大鼠视网膜缺血再灌注12h后,内核层(inner nuclear layer,INL)轻度变薄,细胞数目减少。24h后,视网膜主要表现为节细胞数目减少,细胞变性,INL排列紊乱,细胞数目减少,外核层(outer nuclear layer,ONL)变化不明显。48h后,视网膜内层继续变薄,INL细胞数目明显减少。72h后,视网膜内层明显变薄。与生理盐水组相比,缺血再灌注后不同时间EPO组大鼠视网膜从内核层到内界膜的厚度均超过生理盐水组(P<0.01),INL细胞数目和神经节细胞数目多于生理盐水组,且排列较规整。 (3)TUNEL检测:正常组大鼠视网膜TUNEL染色阴性。生理盐水组大鼠视