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目的：本实验通过研究三种排龈线(肾上腺素排龈线、硫酸铝排龈线、不含药排龈线)的细胞相容性及排龈线在不同浸提时间(5min、10min、15min、30min)下对体外培养人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts, HGFs)的毒性大小,为临床选择合适的排龈线和排龈时间提供理论依据。方法：实验1、采用组织块培养法培养HGFs,并进行形态学和免疫学鉴定。对HGFs进行冻存与复苏,倒置显微镜下观察细胞形态变化。实验2、三种排龈线(含肾上腺素排龈线、含硫酸铝排龈线、不含药排龈线)分别浸透在含10%胎牛血清的DMEM中24h。浸提液再按1：1和1：4浓度稀释,分别作用于体外培养的HGFs,阴性对照组为含10%胎牛血清的DMEM,噻唑兰(Thi-azolyl blue, MTT)比色测定细胞增殖活性,透射电镜观察细胞超微结构。实验3、将上述每种排龈线各4段,分别浸透在含10%胎牛血清的DMEM中,5min、10min、15min、30min后取出排龈线。采用MTT比色法观察不同时间的浸提液对HGFs的活性影响；Annexin/PI双染法检测不同时间的浸提液对HGFs凋亡的影响。结果：1、HGFs原代培养成功率为86.7%,细胞呈梭形或纺锤形。免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)鉴定抗波形蛋白抗体染色阳性,抗角蛋白抗体染色阴性,为中胚层来源的成纤维细胞。HGFs冻存与复苏成功,细胞经两次传代后生物学性状与原代相似。2、MTT结果显示：每组排龈线浸提液经1：1稀释后细胞活性低于正常(p<0.05),1：4稀释后只有肾上腺素排龈线细胞活性较正常组低(p<0.05)；三组排龈线浸提液毒性大小依次为：肾上腺素排龈线>硫酸铝排龈线>不含药排龈线(p<0.05)。透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope, TEM)观察,肾上腺素组部分细胞出现凋亡,其他两组仅观察到细胞器的损伤。3、MTT结果显示：三种排龈线在不同浸提时间下均产生毒性损伤作用,每组排龈线浸提5min与1Omin的细胞毒性作用相同(p>0.05)；肾上腺素排龈线浸提5min与15min、30min比较差异有统计学意义,硫酸铝排龈线浸提5min与30min比较差异有统计学意义(p<0.05)；不含药排龈线在各个浸提时间段毒性损伤作用相同(p>0.05)。流式细胞仪(Flow cytometer, FCM)观察,不同浸提时间下的排龈线可诱导HGFs凋亡的发生,随着浸提时间延长(15min、30min), HGFs的早期凋亡率逐渐增加,显著高于正常组(p<0.05)。结论：1、采用组织块培养法培养原代HGFs及冻存与复苏方法可行,为进一步从细胞学、分子生物学水平研究口腔材料的细胞相容性奠定了基础。2、各组排龈线浸提液对HGFs都有一定的毒性,肾上腺素排龈线毒性最大,硫酸铝排龈线毒性次之,不含药排龈线也出现了一定的细胞毒性。3、不同浸提时间下的排龈线对HGFs的活性及凋亡有不同程度的影响,随着浸提时间的延长,细胞活性逐渐降低,凋亡率增大。4、使用肾上腺素排龈线排龈时不超过l0min为宜,硫酸铝排龈线排龈不超过15min。