细胞凋亡是多细胞有机体为调控机体发育、维护内环境稳定，基因编码程序的细胞主动死亡过程。通过细胞凋亡能够清除发育过程及成熟个体中多余细胞及老化细胞，清除对机体有害的癌细胞及病毒感染细胞。紫外线模拟物4-硝基喹啉-N-氧化物(4-Nitroquinoline N-oxide， 4-NQO)体内通过代谢变成具有活性的4-羟基氨基喹啉氧化物(Ac-4-HAQO)，与鸟嘌呤上N2和C8以及腺嘌呤上N6结合形成加合物，造成DNA损伤。尽管有报道利用4-MQO诱导细胞凋亡相关的研究，但对4-NQO如何诱导细胞凋亡的机制并不是很清楚，因此本研究主要目的是阐明4-NQO诱导细胞凋亡的分子调控机理。 以胎儿皮肤组织为材料，通过组织块原代培养方法获得人正常皮肤真皮来源的成纤维细胞 (Normal human skin fibroblast，NHSF)。使用4-NQO对NHSF、KB细胞处理，结果表明4-NQO不仅能诱导细胞凋亡，而且细胞凋亡百分率呈现4-NQO浓度和时间依赖性，同时引起细胞线粒体膜大量损伤。因此推测4-NQO造成DNA分子损伤，通过线粒体信号途径诱导细胞发生凋亡。进一步研究发现HaCaT细胞对4-NQO引发的细胞凋亡并不敏感，而HaCaT细胞是一个p53基因突变株，表达的p53蛋白没有功能，所以断定4-NQO诱导的细胞凋亡是p53依赖性的。与此同时，4-NQO分别上调和下调了KB细胞中与线粒体信号途径密切相关的两个基因Bax和Bcl-2的表达水平，激活位于线粒体下游的蛋白caspase-9和caspase-3。另外发现4-NQO使KB细胞p21基因表达水平提高，导致细胞在G<,1>期发生细胞周期阻滞。综合以上结果，认为4-NQO引发细胞在G<,1>期阻滞后，给细胞足够的时间去修复受损的DNA分子；如果DNA分子损伤比较严重，受损的DNA分子不能被修复，则通过p53依赖性的线粒体信号途径诱导细胞凋亡。很明显，4-NQO诱导细胞凋亡的分子调控机制与紫外线(UV)诱导的细胞凋亡并不完全一样，紫外线还可以通过死亡受体途径引发细胞凋亡，而4-NQO不能。 白介素-12(1nkerleukin-12，IL-12)是一个免疫调节能力很强的细胞因子，在免疫系统细胞中有着重要的调节作用。有研究报道IL-12能够通过激活核酸切除修复酶抑制紫外线诱导的上皮细胞凋亡，因此对IL-12是否影响4-NQO诱导的细胞凋亡进行了研究。我们选用了KB细胞和SKOV3细胞进行实验，其中SKOV3能够表达IL-12受体(Inkefleukin-12 receptor，IL-12R)。结果显示，IL-12能够抑制4-HQO诱导的SKOV3细胞凋亡，而对KB细胞没有影响。因此推断IL-12抑制4-NQO诱导的细胞凋亡，但是这种保护作用可能是依赖于IL-12受体的。 利用中国北方人群脐血淋巴细胞作为实验材料，通过细胞培养与体外诱导方法结合RT-PCR技术成功克隆了人IL-12 P35、P40两个亚基cDNA序列。经过序列测定及相关的序列分析证实得到IL-12 P35、P40两个亚基cDNA序列是正确的和可靠的，为下一步的表达研究奠定了基础。在获得IL-12 P35、P40两个亚基cDNA序列的前提下，构建了含有IRES序列的IL-12真核表达载体pP35-IRES-P40，理论上保证P35、P40两个亚基等比例表达。为了进一步验证pP35-IRES-P40的载体是否能够在细胞表达有生物活性的IL-12，进行了CHO细胞表达。通过RT-PCR证明IL-12在细胞中能够的表达。在pP35-IRES-P40载体的基础上，克隆了含有启动基因转录必要调控元件的鸡卵清蛋白基因5’端1.4kb的调控序列，并构建完成包含绿色荧光蛋白基因(GFP)序列的IL-12鸡输卵管特异表达载体pGFP-Pov-P35-IRES-P40。此工作将为今后的鸡输卵管生物反应器研究奠定了基础。